Herstellung und Reinigung rekombinanter Hepatitis-B-Viruspartikel

Beginnen Sie mit Hepatozyten, die auf einer mit Kollagen beschichteten Petrischale kultiviert wurden.

Führen Sie einen mit zwei Plasmiden komplexierten Transfektionsreagenz ein: eines trägt ein modifiziertes Hepatitis-B-Virus- oder HBV-Genom, das andere codiert die viralen Strukturproteine.

Inkubieren, um den Eintritt des Plasmids zu ermöglichen. Innerhalb der Zelle werden virale Gene exprimiert, um strukturelle Proteine und ein modifiziertes HBV-Genom zu produzieren, die sich zu rekombinanten HBV-Partikeln zusammenlagern.

Ersetzen Sie das Medium und inkubieren Sie, um die Produktion und Freisetzung viraler Partikel zu unterstützen.

Sammeln Sie das Medium und zentrifugieren Sie es, um die Partikel abzutrennen.

Sammeln Sie das Überstand und filtrieren Sie ihn, um verbleibende Partikel zu entfernen.

Fügen Sie anschließend Polyethylenglykol und Natriumchlorid hinzu, um virale Partikel auszufällen.

Zentrifugieren Sie, um den Inhalt zu pelletieren. Lösen Sie das Pellet in Puffer auf und zentrifugieren Sie das Sediment erneut. Anschließend schichten Sie es auf ein Saccharose-Kissen.

Führen Sie eine Ultrazentrifugation durch, um virale Partikel durch das Polster zu sedimentieren.

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