JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiologie
0 Ansichten • 2:29 Min. • August 31st, 2026
Entnehmen Sie Moskito-Larven im frühen Instar-Stadium, die anfällig für Virusinfektionen sind.
Überführen Sie die Larven in einen Becher, der entionisiertes Wasser enthält.
Führen Sie ein rekombinantes Densovirus ein, das so konstruiert ist, dass es ein Mikro-RNA-Molekül exprimiert, das Zielgene in Larven unterdrückt. Inkubieren Sie die Probe.
Die Larven nehmen das Virus auf, das anschließend den Darm erreicht.
Das aufgenommene Virus durchquert das Darmepithel und breitet sich in anderen Geweben aus.
Das Virus gelangt über Endozytose in die Larvenzellen und setzt seine DNA im Zellkern frei.
Die virale DNA produziert microRNAs.
Im Zytoplasma binden sich diese microRNAs an den durch RNA induzierten Stummschaltkomplex.
Der Komplex bindet an komplementäre Ziel-mRNAs der Larven und spaltet diese, wodurch die Expression verhindert und eine Genstilllegung bewirkt wird.
Nach der Inkubation die Larven mit entionisiertem Wasser waschen, um nicht aufgenommene virale Partikel zu entfernen.
Überführen Sie die Larven zur Erholung auf eine frische Platte mit Nahrung.
Die mit dem Virus infizierten Mückenlarven, bei denen das Zielgen stillgelegt wurde, sind bereit für nachgeschaltete Anwendungen.
Spülen Sie 100 Larven des ersten Instars von A. albopictus dreimal mit entionisiertem Wasser. Anschließend überführen Sie die Larven in einen Becher, der 95 Milliliter entionisiertes Wasser enthält.
Geben Sie fünf Milliliter der rAaeDV-Stämme hinzu und inkubieren Sie die Larven 24 Stunden bei 28 Grad Celsius. Für einen erfolgreichen Larveninfekt ist es entscheidend, dass die Larven 24 bis 36 Stunden mit den Viruspartikeln in Kontakt bleiben, um hohe Infektionsraten sicherzustellen. Nach der Inkubation waschen Sie die Larven dreimal mit entionisiertem Wasser und überführen Sie sie anschließend zurück in die Platten. Füttern Sie die Larven regelmäßig.