Visualizing Dose-Dependent Spike Protein Uptake with Quantum Dot Conjugates

JoVE Encyclopedia of Experiments

Mikrobiologie

0 Ansichten • 2:46 Min. • July 31st, 2026

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Begin with a multi-well plate containing a culture of adherent mammalian cells.

These cells are engineered to express the human angiotensin-converting enzyme 2 receptor, tagged with green fluorescent protein (ACE2-GFP).

Remove the culture medium.

Wash the cells with an imaging medium to eliminate residual culture medium.

Prepare serial dilutions of quantum dot-spike (QD-Spike), in the imaging medium supplemented with a blocking agent to minimize nonspecific binding.

QD-Spike mimics a pseudovirus composed of fluorescent quantum dots conjugated to coronavirus spike proteins.

Add each dilution to a separate well and incubate.

The spike proteins bind specifically to the ACE2-GFP receptors on the host cell membrane.

This interaction triggers receptor-mediated endocytosis, leading to QD-Spike internalization.

After incubation, use confocal imaging to capture intracellular fluorescence signals.

Higher concentrations of QD-Spike produce stronger intracellular fluorescence, confirming concentration-dependent spike binding.

Further, co-localization of QD-Spike with ACE2-GFP confirms receptor-mediated uptake.

To prepare 0.1% BSA, add 130 microliters of 7.5% BSA to 10 milliliters of imaging media in mix. For a 6.1 to three serial dilution and triplicate add 14.26 microliters of QD Spike to 285.74 microliters of the 0.1% BSA to make the highest concentration of 20 nanomolar.

Then add 100 microliters of 20 nanomolar or QD Spike to 200 microliters of 0.1% BSA to make the second delusion of 6.67 nanomolar QD Spike. Remove all spent media from each well with a multi-channel aspirator, wash once with a multi-channel pipette with 100 microliters of imaging media per well, then aspirate 100 microliters of the imaging media. Add back 50 microliters of QD Spike solution per well and incubate the plate for three hours in a humidified incubator at 37 degree Celsius with 5% carbon dioxide.

08:40

Produktion von Pseudotyped Partikel hoch pathogene Coronaviren in eine Einstellung "Biosafety Level 2" zu studieren

Ähnliche Videos

0 Aufrufe

06:03

Verwendung von Viral Entry Assays und Molekulardocking-Analysen zur Identifizierung antiviraler Kandidaten gegen Coxsackievirus A16

Ähnliche Videos

0 Aufrufe

08:13

Visualisierung der subzellulären Lokalisation eines Proteins im Herzen mittels Quantenpunkt-vermittelter Immunmarkierung gefolgt von Transmissionselektronenmikroskopie

Ähnliche Videos

0 Aufrufe

12:19

Mapping molekulare Diffusion in der Plasmamembran durch Multiple-Target Tracing (MTT)

Ähnliche Videos

0 Aufrufe

13:06

Solubilisierung und Bio-Konjugation von Quantenpunkten und bakterielle Toxizitätstests von Wachstumskurve und Keimzahl

Ähnliche Videos

0 Aufrufe

17:14

Compact Quantum Dots für Einzelmolekül-Imaging

Ähnliche Videos

0 Aufrufe

04:59

Bewertung der intrazellulären Verteilung von Virus-abgeleiteten peptidmodifizierten Antikörperkonjugaten

Ähnliche Videos

0 Aufrufe

10:16

Produktion und Targeting von Monovalenter Quantenpunkte

Ähnliche Videos

0 Aufrufe

10:56

Synthese von Cd-frei InP / ZnS-Quantenpunkte Geeignet für biomedizinische Anwendungen

Ähnliche Videos

0 Aufrufe

11:16

Korrelative Light- und Elektronenmikroskopie Quantum Dot Nanopartikel

Ähnliche Videos

0 Aufrufe

Zuletzt aktualisiert: 15 August 2026