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Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:28 Min. • August 31st, 2026
Entnehmen Sie eine Kultur genetisch veränderter Spirochätenbakterien. Diese Bakterien tragen das Gentamicin-Resistenzgen.
Fügen Sie eine Bakteriophagen-Suspension zur Bakterienkultur hinzu.
Die Phagen tragen Plasmid-DNA, die ein Kanamycin-Resistenzgen codiert.
Die Mischung inkubieren.
Der Bakteriophage bindet an die bakterielle Oberfläche und injiziert die DNA in die Zelle.
Das Plasmid repliziert sich unabhängig und wird weitergegeben, wenn sich die Bakterien teilen.
Die inkubierte Kultur mit einem geschmolzenen Agarose-Medium, das mit den Antibiotika Gentamicin und Kanamycin angereichert ist, vermischen.
Geben Sie die Mischung in eine Petrischale. Lassen Sie sie erstarren und inkubieren Sie anschließend.
Unter Doppelantibiotikaselektion wachsen nur Zellen, die beide Resistenzmarker tragen, und bilden Kolonien, während die verbleibenden Zellen absterben.
Wählen Sie eine Kolonie aus und impfen Sie sie in ein Medium, das beide Antibiotika enthält.
Inkubieren Sie, um das Wachstum von Bakterien mit dem transduzierten Plasmid für weitere downstream-Analysen zu fördern.
Den Überstand abgießen und das Pellet in 14,5 Milliliter frischem BSK resuspendieren. Weniger als oder gleich 500 Mikroliter PEG-p
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