Gentransfer in intestinale Organoide der Maus unter Verwendung von lentiviralen Vektoren
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Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:30 Min. • August 31st, 2026
Beginnen Sie mit teilweise dissoziierten murinen Dünndarm-Organoiden, um die lentivirale Transduktion zu erleichtern.
Nehmen Sie die lentiviralen Vektoren in einem Transduktionsmedium.
Das Lentivirus trägt ein Gen der Interesse für die stabile Integration in das Wirtsgenom.
Fügen Sie das Lentivirus dem Gewebekulturbrüfling hinzu.
Die Mischung inkubieren, um den viralen Eintritt zu ermöglichen.
Die virale RNA wird in DNA umgeschrieben und integriert sich in das Wirtsgenom ein.
Fügen Sie ein Organoid-Medium hinzu und überführen Sie die Mischung in ein Reagenzglas.
Zentrifugieren, um nicht gebundene Viren zu entfernen.
Mischen Sie das Pellet in einer Basalmembranmatrix.
Stellen Sie die Organoide in eine Vertiefung und lassen Sie sie erstarren.
Die Matrix bildet ein Netzwerk, das Organoiden einschließt und strukturelle Unterstützung bietet.
Fügen Sie Organoid-Medium, ergänzt mit Wachstumsförderern, hinzu, um die Proliferation der Organoiden zu unterstützen.
Dies führt zu knospenden Organoiden, die das transduzierte Gen enthalten und für weitere funktionelle Analysen verwendet werden können.
Überführen Sie die Organoiden in dieser letzten kleinen Menge Medium in eine Vertiefung einer 48-Loch-Platte.
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