Gewinnung des Zika-Virus aus in vitro transkribierter RNA
JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Mikrobiologie
0 Aufrufe • 3:36 Min. • August 31st, 2026
Beginnen Sie mit Röhrchen, die eine Suspension von Vero-Zellen enthalten.
Wasser zur Kontrollprobe hinzufügen und eine in vitro transkribierte (IVT)-RNA in die Versuchsprobe einführen.
Die RNA repräsentiert das vollständige Genom des Zika-Virus.
Überführen Sie jede Probe in Elektroporationsküvetten.
Elektroporation anwenden.
Ein kurzer elektrischer Impuls stört die Membran der Wirtszelle und erzeugt vorübergehende Poren, wodurch die RNA in die Zellen eindringen kann.
Fügen Sie ein Medium hinzu, um die Zellerholung zu unterstützen.
Überführen Sie die Zellen in Flaschen, die ein Medium enthalten.
Inkubieren, um der viralen RNA die Möglichkeit zu geben, die Proteinsynthese und die Genomreplikation anzutreiben, was zur Assemblierung neuer Virionen führt.
Die Virionen werden freigesetzt und verbreiten sich auf benachbarte Zellen.
Die zunehmende intrazelluläre Viruslast führt letztendlich zum Absterben der Wirtszelle.
Überwachen Sie die Kulturen unter dem Mikroskop.
Ein erhöhter Zelltod in der experimentellen Probe im Vergleich zur Kontrolle bestätigt die Gewinnung infektiösen Virus aus IVT-RNA.
Einen oder zwei Tage vor der Elektroporation einen T182-Flaschenkolben mit Vero-Zellen pro zu isolierendem
Sehen Sie sich das vollständige Transkript an und erhalten Sie Zugang zu Tausenden wissenschaftlicher Videos