Multiplexes Fluoreszenz-Imaging von viralen Nukleinsäuren und Proteinen in infizierten menschlichen Lymphozyten
JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:36 Min. • August 31st, 2026
Beginnen Sie mit humanen Lymphozyten, die mit HIV-1 infiziert sind und auf einem Deckglas auf einem Objektträger montiert sind.
Diese Zellen wurden mit Sonden hybridisiert, die virale RNA und provirale DNA fluoreszenzmarkieren.
Die Zellen in einer Blockierungslösung inkubieren, um eine unspezifische Antikörperbindung zu verhindern.
Fügen Sie primäre Antikörper ein, die gegen das HIV-1-Kapsidprotein gerichtet sind.
Inkubieren Sie, um den Bindungsprozess der primären Antikörper an das Kapsidprotein zu ermöglichen.
Waschen Sie die Zellen mit Puffer, um ungebundene Antikörper zu entfernen.
Fügen Sie fluoreszenzmarkierte sekundäre Antikörper hinzu, die an die primären Antikörper binden.
Die nicht gebundenen Antikörper abwaschen.
Fügen Sie einen DNA-spezifischen Farbstoff hinzu, um die Kerne der Zellen anzufärben, und waschen Sie anschließend überschüssigen Farbstoff weg.
Verwenden Sie die multiplexe Fluoreszenzbildgebung, um virale DNA, RNA, Proteine und Wirtszellkerne gleichzeitig in unterschiedlichen Farben nachzuweisen.
Diese Einzelzellvisualisierung ermöglicht die Untersuchung verschiedener Stadien des viralen Lebenszyklus durch die gleichzeitige Visualisierung von viraler DNA, RNA und Protei
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