Reinigung von Prototype-Foamy-Virus-Intasomen mittels Größenausschlusschromatographie

Beginnen Sie mit einer Suspension, die Präzipitate von Prototyp-Foamyvirus- oder PFV-Intasomen, monomeren Integrases, DNA-Oligomeren und Proteinaggregaten enthält.

PFV-Intasomen sind Tetramere viraler Integrassen, die mit synthetischen Oligomeren komplexiert sind und virale genomische DNA mimikrieren.

Fügen Sie eine Salzlösung zur Suspension hinzu und inkubieren Sie sie auf Eis. Das Salz verringert die elektrostatischen Wechselwirkungen zwischen den Intasomen, wodurch die Präzipitate löslich werden.

Pipettieren Sie in regelmäßigen Abständen vorsichtig, um die Solubilisierung des Intasoms zu fördern.

Zentrifugieren Sie, um das verbleibende Präzipitat zu pelletieren, und sammeln Sie den Überstand, der lösliche Intasomen enthält.

Nehmen Sie eine vorgeregelte Säule für die Größenausschlusschromatographie, die mit vernetzten Agarosekügelchen gefüllt ist, und geben Sie das Überstand auf die Säule.

Aufgrund ihrer großen Größe umgehen Proteinaggregate und Intasome die Poren der Kügelchen und eluieren früher.

Kleinere monomere Integrassen und Oligomere dringen in die Poren der Kugeln ein und eluieren später.

Sammeln Sie die früh eluierten Fraktionen, die Intasomen enthalten, für weitere downstream-