JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:52 Min. • August 31st, 2026
Beginnen Sie mit einer Kultur menschlicher Leberkrebszellen, die mit Hepatitis-E-Virus-(HEV-)RNA transfectiert wurden, um virale Partikel zu erzeugen.
Einige HEV-Viren nehmen eine vom Wirt stammende endosomale Membran auf und verlassen die Zelle, während andere als nicht umhüllte HEV-Viren in der Zelle verbleiben.
Um extrazelluläre HEV-Partikel zu gewinnen, sammeln und filtern Sie das Kulturüberstand, um zelluläres Material zu entfernen.
Aufbewahren bei extrem niedriger Temperatur, um die Infektiosität zu erhalten.
Um intrazelluläre HEV-Partikel zu gewinnen, waschen Sie die Zellen mit einem Puffer.
Fügen Sie Trypsin-EDTA hinzu, um die Zellen zu lösen, und geben Sie anschließend ein Medium zu, um die enzymatische Aktivität zu stoppen.
Übertragen Sie die Suspension in ein Reagenzglas und zentrifugieren Sie sie.
Entfernen Sie den Überstand, der restliches Trypsin enthält. Resuspendieren Sie das Pellet und überführen Sie es in ein Reaktionsgefäß.
Frieren Sie die Zellen in flüssigem Stickstoff ein und tauen Sie sie auf Eis auf.
Wiederholen Sie die Gefrier-Tau-Zyklen, um die Zellen zu lysieren und die Viren freizusetzen.
Zentrifugieren, das Überstand mit den Viren sammeln und bei extrem niedriger
Sehen Sie sich das vollständige Transkript an und erhalten Sie Zugang zu Tausenden wissenschaftlicher Videos