Sendai-Virus-vermittelte Reprogrammierung menschlicher Blutzellen in induzierte pluripotente Stammzellen

Entnehmen Sie eine Kultur menschlicher peripherer mononuklearer Blutzellen (PBMCs).

Fügen Sie das Sendai-Virus hinzu, das Reprogrammierungstranskriptionsfaktoren kodiert. Decken Sie die Platte ab und versiegeln Sie sie.

Zentrifugieren, um den Virus-Zell-Kontakt zu verbessern, und anschließend inkubieren.

Nach der Virusfusion exprimiert die virale RNA Transkriptionsfaktoren, die zelluläre Pluripotenzgene aktivieren und linien-spezifische Gene unterdrücken, um die Reprogrammierung einzuleiten.

Dabei wandelt sich eine Teilmenge der transduzierten PBMCs in induzierte pluripotente Stammzellen (iPSCs) um und exprimiert Adhäsionsproteine.

Überführen Sie sie in eine matrixbeschichtete Vertiefung und zentrifugieren Sie die Zellen. Ersetzen Sie den Überstand durch ein Wachstumsmedium.

Nach der Inkubation heften sich die iPSCs an die Matrix an, während transduzierte nicht-anklebende PBMCs in Suspension verbleiben.

Übertragen Sie die Suspension in einen beschichteten Well und zentrifugieren Sie sie. Geben Sie das Medium in den ursprünglichen Well und inkubieren Sie beide.

Die verbleibenden transduzierten PBMCs beginnen die Umprogrammierung, wandeln sich in iPSCs um und heften sich an. Dieser Schritt m