JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Mikrobiologie
0 Aufrufe • 3:41 Min. • August 31st, 2026
Beginnen Sie mit Röhrchen, die humane Lungepithelzellen enthalten.
Fügen Sie biotinylierte Influenzaviren hinzu und inkubieren Sie auf Eis. Die Viren binden an die Zelloberfläche, werden dabei aber nicht internalisiert.
Zentrifugieren Sie, um die virusgebundenen Zellen zu trennen, entfernen Sie das Überstand und resuspendieren Sie die Zellen.
Fügen Sie in die Probe des Anfangszeitpunkts unbezeichnetes Streptavidin hinzu, das an die biotinylierten Viren bindet und Komplexe bildet.
Geben Sie fluorophor-markiertes Streptavidin hinzu, das nicht an den Streptavidin-Biotin-Virus-Komplex bindet. Waschen und fixieren Sie die Zellen.
Die Probe des späteren Zeitpunkts bei einer höheren Temperatur inkubieren, um die Virus-Internalisierung zu ermöglichen, dann wieder auf Eis stellen.
Unmarkierten Streptavidin und ein Internalisierungs-blockierendes Agens, das eine weitere virale Aufnahme verhindert, hinzufügen und inkubieren. Streptavidin bindet biotinylierte, an der Oberfläche gebundene Viren, anschließend waschen.
Fixieren Sie die Zellen und geben Sie einen Puffer mit Tensid hinzu, um sie zu permeabilisieren.
Waschen und fluorophor-markiertes Streptavidin hinzufügen, das in die Zellen eindringt und
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