JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:48 Min. • August 31st, 2026
Entnehmen Sie eine Zellkultur aus sich in der stationären Phase befindlichen Säugetierzellen mit minimaler DNA-Replikation und sammeln Sie das konditionierte Medium.
Fügen Sie Herpes-simplex-Virus (HSV) hinzu und inkubieren Sie unter gelegentlichem Schütteln, um die virale Anheftung zu ermöglichen. Waschen Sie, um nicht gebundenes Virus zu entfernen, und geben Sie das konditionierte Medium wieder dazu.
Nach der Inkubation fusioniert das Virus mit der Wirtsmembran und setzt das Nukleokapsid in das Zytoplasma frei.
Die virale dsDNA gelangt in den Zellkern, zirkularisiert und exprimiert virale Proteine für die virale DNA-Replikation.
Die viralen und Wirtseigenen Proteine entwinden die virale DNA und synthetisieren einen RNA-Primer. Anschließend bindet der virale DNA-Polymerase-Komplex und verlängert den Primer zur DNA-Synthese.
Während der Fortschritt der Replikation fügen Sie ein Nukleosidanalogon zum Kulturmedium hinzu. Es gelangt in die Zellen und wird in die Triphosphatform umgewandelt.
Da die Replikation der Wirt-DNA minimal ist, wird das Analogon vorzugsweise in die replizierende virale DNA eingebaut und markiert so die viralen Genome.
Die markierten viralen Genome stehen bereit für di
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