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Mikrobiologie
0 Aufrufe • 5:13 Min. • August 31st, 2026
Entnehmen Sie die Zellkerne, die virale Genome enthalten, die mit alkinmodifizierten Nukleotiden markiert sind.
Suspendieren Sie die Kerne in einer Mischung aus Biotin-Azid und Kupferionen, und inkubieren Sie.
Das Kupferion unterstützt die kovalente Bindung der Azid- und der Alkin-Gruppe.
Zentrifugieren und das Überstand entfernen.
In Puffer resuspendieren, übertragen und zentrifugieren, um ein Pellet zu bilden.
Blitzgefrieren und anschließendes Auftauen des Pellets zur Unterstützung der Lyse.
Suspendieren und beschallen, um die Kerne zu lysieren.
Zentrifugieren und das Überstand, der Protein-virale DNA-Komplexe enthält, sammeln.
Filtern Sie das Überstand, um Kontaminationen zu entfernen.
Verdünnen Sie das Filtrat.
Geben Sie magnetische Biotin-Bindungsperlen mit Streptavidin-Beschichtung hinzu und inkubieren Sie, um die Bindung an biotinylierte Protein-DNA-Komplexe zu ermöglichen.
Ein Magnetfeld anlegen, um die Kügelchen zu sammeln, und waschen, um Verunreinigungen zu entfernen.
Wiederholen Sie den Waschschritt.
Fügen Sie einen Elutionspuffer hinzu und erhitzen Sie, um die Proteine zu trennen und zu denaturieren.
Trennen Sie die Kügelchen und sammeln Sie das Eluat.
Tiefgefrieren Sie die isolierte
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