Isolierung endogener Viren aus wildlebenden Drosophila mithilfe von gentechnisch veränderten permissiven Zelllinien
JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Mikrobiologie
0 Aufrufe • 1:32 Min. • October 29th, 2026
Beginnen Sie mit einem Reagenzglas, das anesthetisierte erwachsene Drosophila desselben Geschlechts und derselben Art enthält.
Fügen Sie einen Puffer hinzu und homogenisieren Sie die Probe, um endogene Viruspopulationen und Bakterien freizusetzen.
Zentrifugieren Sie das Homogenat und führen Sie das Überstand durch eine Membran mittels Zentrifugation, um Bakterien und Trümmer zu entfernen.
Überführen Sie das Filtrat in eine Mehrfach-Well-Platte, die modifizierte Drosophila-Zellkulturen enthält, die für RNA-Viren permeabel sind, und inkubieren Sie es.
Die Viren dringen in die Wirtszelle ein über rezeptorvermittelte Endozytose
Sobald das Virus in der Zelle ist, repliziert sich das virale Genom und erzeugt doppelsträngige RNA (dsRNA). Zwischenprodukte.
Die Wirtszellen exprimieren ein Suppressorenpotein, das an die dsRNA bindet und deren Abbau durch Dicer, das Abwehrenzym des Wirts, verhindert.
Dies ermöglicht die virale RNA-Synthese und die Produktion viraler Proteine, wodurch die Virusreplikation und -vermehrung gefördert wird.
Hohe Viruslasten beeinträchtigen das Wachstum der Wirtszellen und verursachen zytopathische Effekte.
Zentrifugieren Sie die Platte kurz.
Sammeln Sie den Überstand, der v
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