JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Mikrobiologie
0 Aufrufe • 4:35 Min. • August 31st, 2026
Beginnen Sie mit infizierten Säugetierzellen, die mit einem Adenovirus infiziert wurden.
Führen Sie wiederholte Gefrier-Tau-Zyklen durch, um die Zellen zu lysieren und die Virionen freizusetzen.
Zentrifugieren Sie das Lysat, um den Zelltrümmern zu pelletieren. Sammeln Sie den Überstand, der die viralen Partikel enthält.
Schichten Sie das virale Überstand auf einen gestuften Cäsiumchlorid-Gradienten zur dichteabhängigen Trennung auf.
Ultrazentrifugieren Sie, um die Virenpartikel entsprechend ihren Auftriebsdichten wandern zu lassen.
Intakte Virionen, die das vollständige Adenovirusgenom enthalten, sind aufgrund der verpackten DNA dichter und sammeln sich in einer unteren Bande, während leichtere, leere Kapside und Zelltrümmer in den oberen Schichten verbleiben.
Entfernen Sie die oberen Schichten. Sammeln Sie das untere Band der genomhaltigen Virionen.
Suspendieren Sie die Virionen in Cäsiumchlorid mit einheitlicher Dichte und führen Sie eine erneute Ultrazentrifugation durch, um die Trennung zu verfeinern und die vollständigen Partikel anzureichern.
Entfernen Sie die oberen Schichten und gewinnen Sie das untere Band.
Dialysieren Sie die Probe, um das Cäsiumchlorid zu entfernen.
Die hochreinen
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