JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiologie
0 Ansichten • 2:08 Min. • August 31st, 2026
Beginnen Sie mit einer in Rückenlage befindlichen, anesthetisierten Maus, deren Brusthaut rasiert ist.
Desinfizieren Sie die rasierte Haut.
Verwenden Sie die Ultraschallbildgebung, um das Herz sichtbar zu machen und die Außenwand des linken Ventrikels zu identifizieren.
Nehmen Sie eine Mikrospritze, die ein rekombinantes Virus enthält, das ein Testgen kodiert, von dem vermutet wird, dass es die Herzfunktion beeinflusst.
Unter Ultraschallführung die Nadel in die Ventrikulwand einführen.
Spritzen Sie das Virus in die Muskelschicht der Wand.
Führen Sie eine zweite und dritte Injektion durch, wobei unterschiedliche ventrikuläre Stellen angepeilt werden, um eine breitere Genexpression zu erzielen.
Ziehen Sie die Nadel heraus und lassen Sie die Maus sich erholen.
Das Virus bindet an Rezeptoren auf Herzmuskelzellen der Ventrikel und initiiert so die rezeptorvermittelte Endozytose sowie den Transport des viralen Genoms in den Zellkern.
Die Expression des viralen Genoms führt zur Synthese des kodierten Proteins.
Das Mausmodell ist nun bereit, um die Auswirkungen der virusinduzierten Genexpression auf die Herzfunktion zu untersuchen.
Desinfizieren Sie zunächst die linke untere Brustregion der anesthetisierten Maus durch dreimaliges kreisförmiges Abwischen abwechselnd mit einer jod- oder chlorhexidinbasierten Lösung und Alkohol. Unter Ultraschallbildgebung führen Sie die Nadel der Spritze, die das Virus enthält, in die Brust des Tieres ein.
Führen Sie die Nadelspitze in die vordere freie Wand des linken Ventrikels ein und injizieren Sie langsam 10 bis 15 µL des Virus. Überprüfen Sie die erfolgreiche Injektion anhand der erhöhten Helligkeit in der Nähe der Nadelspitze in den Ultraschallbildern. Ziehen Sie die Nadel aus dem Herzen zurück und führen Sie sie in andere Bereiche des linken Ventrikels ein, um eine zweite und dritte Injektion der gleichen Virusmenge durchzuführen.