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Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:08 Min. • August 31st, 2026
Beginnen Sie mit einem Bioreaktorsystem, das ein entzelluläres Gerüst aus einer Rattenleber enthält, das mit menschlichen Leberzellen wiederbesiedelt wurde.
Das Gerüst wird in einem Flusssystem gehalten, das Medien zirkulieren lässt, um Nährstoffe bereitzustellen.
Laden Sie eine Spritze mit einem Puffer, der einen rekombinanten adeno-assoziierten Virusvektor enthält.
Der Vektor trägt eine selbstkomplementäre DNA mit einer Transgen-Kassette, die einen fluoreszierenden Reporter und eine Gen-silenzierende RNA codiert.
Stoppen Sie den Medienfluss und trennen Sie die Zulaufschläuche.
Spritzen Sie den Vektor durch das Hauptblutgefäß, das das Gerüst versorgt.
Incubieren, um die Wechselwirkung zwischen Vektor und Zelle zu ermöglichen.
Der Vektor gelangt über eine rezeptorgesteuerte Endozytose in die Leberzellen.
Einmal im Inneren angekommen, entkommt der Vektor dem Endosom und setzt seine selbstkomplementäre DNA im Zellkern frei.
Selbstkomplementäre DNA ermöglicht die direkte Expression des Transgens und führt zur Produktion eines fluoreszierenden Proteins sowie einer Gen-silenzierenden RNA.
Setzen Sie den Medienfluss allmählich fort, um die Zirkulation durch das Gerüst wiederherzustellen.
Das transduzierte Lebermodell ist nun für die nachgeschaltete Analyse geeignet.
Transduzieren Sie nun das Lebermodell. Zunächst werden 27 Billionen Vektoren in fünf Milliliter PBS in eine Spritze gefüllt. Phenolrot kann mit 5 Mikrogramm pro Milliliter hinzugefügt werden.
Trennen Sie dann die Leber vom Medienkreislauf und injizieren Sie die Vektoren in das System. Inkubieren Sie das System nach der Injektion eine Stunde lang ohne Pumpbetrieb. Anschließend erhöhen Sie den Fluss schrittweise wie zuvor beschrieben.
Später, während die transduzierte Leber über sechs Tage inkubiert wird, wechseln Sie alle zwei Tage 50 Milliliter des Mediums.