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Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:27 Min. • August 31st, 2026
Beginnen Sie mit gefrorenem rekellularisiertem Rattengewebegewebe, das humane Hepatozyten enthält und in Kryomedium eingebettet ist.
In diesem Gewebe exprimieren die transduzierten Hepatozyten das smaragdgrüne fluoreszierende Protein (EmGFP), ein Reporterprotein, das durch den viralen Vektor kodiert wird.
Verwenden Sie ein Kryotom, um dünne Schnitte anzufertigen, die die zelluläre und histologische Architektur erhalten. Übertragen Sie die Schnitte auf einen Objektträger.
Behandeln Sie die Schnitte mit einem milden Detergens, um die Zellmembran permeabilisierbar zu machen.
Applizieren Sie einen anti-EmGFP-Primärantikörper, der spezifisch an das fluoreszierende Reportergegenprotein bindet, das in transduzierten Zellen exprimiert wird.
Spülen, um ungebundene Antikörper zu entfernen.
Führen Sie einen sekundären Antikörper ein, der mit einem roten Fluorophor konjugiert ist und an den primären Antikörper bindet, und waschen Sie anschließend.
Fügen Sie einen DNA-spezifischen blauen Fluoreszenzfarbstoff hinzu, der an zelluläre DNA bindet.
Unter einem Fluoreszenzmikroskop bestätigt die Kolokalisation der roten Fluoreszenz mit blau angefärbten Kernen, dass die transduzierten Hepatozyten im Lebergewe
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