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Mikrobiologie
0 Aufrufe • 3:33 Min. • August 31st, 2026
Nehmen Sie eine humane Zellkultur.
Fügen Sie Lentiviren hinzu, die eine konditionale, gegen die Wirt-mRNA gerichtete shRNA unter einem Tetracyclin-reaktiven Promotor, der mit einem Operator verbunden ist, kodieren.
Das Lentivirus trägt außerdem Gene für einen Tetracyclin-Repressor und ein Antibiotikaresistenzprotein, die unter einem konstitutiven Promotor platziert sind.
Inkubieren, um die Übertragung der viralen RNA in die Wirtszellen zu ermöglichen.
Die RNA wandelt sich in cDNA um und integriert sich in das Wirts-Genom ein.
Waschen, Medium hinzufügen und inkubieren, um die Expression des Tetracyclin-Repressors und des Antibiotikaresistenzproteins zu ermöglichen, wodurch transduzierte Zellen generiert werden. Der Tetracyclin-Repressor bindet an den Operator und unterdrückt die Expression der shRNA.
Waschen, antibiotisch ergänztes Medium hinzufügen und inkubieren.
Transduzierte Zellen exprimieren das Antibiotikaresistenzprotein, wodurch ihr selektives Überleben in Gegenwart des Antibiotikums ermöglicht wird.
Fügen Sie Doxycyclin, ein Tetracyclin-Analogon, der Kultur hinzu.
Doxycyclin bindet an den Tetracyclin-Repressor und verhindert dessen Bindung an den Operator, wodurch die shRNA-Express
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