Herstellung einer virusangereicherten Suspension mittels stufenweiser Saccharose-Zentrifugation

Beginnen Sie mit einem kegelförmigen Ultrazentrifugenröhrchen, das einen Saccharose-Gradienten enthält.

Fügen Sie das virusenthaltende Überstand vorsichtig obenauf hinzu.

Zentrifugieren Sie mit kontrollierter Beschleunigung und Verzögerung, um den Gradienten zu erhalten, sodass die Teilchen während der Zentrifugation in die Schicht wandern können, die ihrer Auftriebsdichte entspricht.

Leichtere Proteine verbleiben in der oberen Schicht. Intakte virale Partikel konzentrieren sich zwischen den Schichten mit niedrigerer und höherer Dichte, während schwereres zelluläres Material am Boden sedimentiert.

Entfernen Sie die oberen Schichten und sammeln Sie die mittleren, virusangereicherten Sucrosequoten in einem frischen Röhrchen.

Puffer hinzufügen und die Probe mehrmals mischen.

Anschließend vorsichtig die virale Suspension in einem frischen Röhrchen über ein Sucrose-Kissen mit geringer Dichte schichten.

Zentrifugieren Sie die Suspension. Schwerere Viruspartikel setzen sich am Boden ab, während die leichteren Verunreinigungen im Überstand verbleiben.

Verwerfen Sie den Überstand. Lassen Sie die restliche Flüssigkeit ab, indem Sie das Röhrchen auf ein Papiertuch stülpen.

Lösen Sie das virale Pellet