Bestimmung des Lentivirustiters mittels eines Enzyme-Linked Immunosorbent Assays

Verwenden Sie lentivirale Vektoren, die das HIV-1-p24-Antigen enthalten, ein Proteinmarker, der für den Nachweis verwendet wird.

Fügen Sie ein Detergens hinzu, um p24 zu lysieren und freizusetzen, und verdünnen Sie die Probe anschließend seriell.

Verwenden Sie eine Mikroplatte, die mit anti-p24 monoklonalen Antikörpern beschichtet und mit einem Blockierungsmittel versehen ist, um unspezifische Bindung zu verhindern.

Fügen Sie die Probenverdünnungen und p24-Standards als Referenzen hinzu.

Inkubieren, um die Wechselwirkung von p24 mit den Antikörpern über ein spezifisches Epitop zu ermöglichen, anschließend nicht gebundene Komponenten entfernen.

Inkubieren Sie mit anti-p24 polyklonalen Antikörpern, die an verschiedene Epitope auf p24 binden. Entfernen Sie alle nicht gebundenen Antikörper.

Fügen Sie Peroxidase-markierte Antikörper hinzu, die an die polyklonalen Antikörper binden. Entfernen Sie ungebundene Antikörper.

Fügen Sie ein Peroxidase-Substrat hinzu, das in ein farbiges Produkt umgewandelt wird.

Fügen Sie eine Säure hinzu, um die Peroxidase zu inaktivieren und das Produkt zu stabilisieren.

Messen Sie die Absorption, die der Farbintensität entspricht und proportional zur p24-Konzentrati