Reinigung rekombinanter Viruspartikel aus transfizierten menschlichen Nierenzellen

Beginnen Sie mit einem Zelllysat, das zelluläre DNA enthält, die mit zellulären Proteinen und viralen Partikeln aggregiert ist.

Fügen Sie Magnesiumionen hinzu, gefolgt von einer Nuklease, um den enzymatischen Abbau der zellulären DNA zu aktivieren und DNA-Protein-Aggregate aufzulösen.

Zentrifugieren, um Trümmer zu trennen, und das Überstand entnehmen, der virale Partikel enthält.

Schichten Sie das Überstand auf ein diskontinuierliches Iodixanol-Gradient mit von oben nach unten zunehmenden Konzentrationen und füllen Sie das Gefäß anschließend mit Puffer.

Ultrazentrifugieren, um die Komponenten basierend auf ihrer Dichte zu trennen. Die Viruspartikel sammeln sich an der Grenzfläche zwischen den Schichten mit hoher und mittlerer Dichte an.

Führen Sie eine Nadel an dieser Grenzfläche ein und sammeln Sie die Viruspartikel in einem Reagenzglas auf.

Fügen Sie ein Puffermittel mit stabilisierenden Bestandteilen hinzu, das die Aggregation von Viruspartikeln verhindert.

Überführen Sie die Lösung dann in ein Gefäß mit einem Membranfilter.

Zentrifugieren Sie, um die viralen Partikel oberhalb des Filters zu konzentrieren.

Fügen Sie den Puffer mit Zusatz des stabilisierenden Agents hinzu und zentrifugier