Immortalisierung von Endothelzellen durch retrovirale Transduktion viraler Onkogene

Nehmen Sie ein Medium, das Retroviruspartikel enthält, welche virale Onkogene und ein Antibiotikaresistenzgen kodieren.

Zentrifugieren Sie das Medium, um Zelltrümmer zu entfernen.

Sammeln Sie das Überstand enthaltende Viruspartikel und geben Sie ihn auf eine Kultur von Endothelzellen.

Incubieren, um den viralen Eintritt zu ermöglichen.

Die virale RNA wird in DNA umgeschrieben, die in das Wirtsgenom integriert wird.

Das Antibiotikaresistenzgen erzeugt ein Resistenzprotein. Die Onkogene produzieren Proteine, die an Tumorsuppressorproteine binden, welche die Zellteilung kontrollieren, und inaktivieren diese, wodurch die Lebensdauer der Zelle verlängert wird.

Ersetzen Sie das Medium durch frisches Medium.

Erneut inkubieren, um eine stabile Integration der viralen DNA sicherzustellen.

Entfernen Sie das Medium und waschen Sie die Zellen.

Ein enzymatisches Dissoziationssystem hinzufügen, um die Zellen zu lösen.

Übertragen Sie die Zellsuspension, zentrifugieren Sie diese und entfernen Sie das Überstand.

Suspendieren Sie das Pellet und überführen Sie es in einen Kolben.

Fügen Sie ein Antibiotikum dem Medium hinzu.

Nur Zellen, die das Antibiotikaresistenzprotein exprimieren, überleben, wodurch Zellen aus