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Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:52 Min. • September 30th, 2026
Beginnen Sie mit einer bakteriellen Kultur, die ein integriertes Prophagen-Genom aufweist, das durch ein Phagen-Repressorprotein unterdrückt wird und somit eine ruhende lysogene Phase aufrechterhält.
Fügen Sie einen Induktor hinzu und inkubieren Sie unter Schütteln, um zellulären Stress auszulösen.
Der zelluläre Stress induziert die Autospaltung des Repressorproteins, wodurch das Prophage von der Lysogenie in die lytische Replikation übergehen kann.
Die Prophagen-DNA spaltet sich aus dem bakteriellen Genom aus und transkribiert nacheinander frühe regulatorische Gene, mittlere DNA-Replikationsgene sowie späte strukturelle Gene und Lysogene.
Überführen Sie die Kultur in ein großes Volumen Medium, um den Induktor zu verdünnen, und inkubieren Sie, um die Zellen regenerieren zu lassen.
In definierten Abständen eine Stopplösung hinzufügen, um die Transkription zu stoppen und das RNA-Profil in den bakteriellen Zellen zu stabilisieren.
Zentrifugieren Sie die Kultur und entfernen Sie den Überstand. Resuspendieren Sie die Zellen, überführen Sie die Suspension in ein kleines Reaktionsgefäß und zentrifugieren Sie erneut.
Entfernen Sie den Überstand und tiefgefrieren Sie das Pellet, um die RNA-Integri
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