JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:06 Min. • August 31st, 2026
Beginnen Sie mit einer mehrschichtigen Zellkammer, die transfizierte Säugerzellen enthält, die adenoassoziierte Virusvektoren produzieren. Die Zellkammer trägt zu einer virusreichen Ernte bei.
Schütteln Sie die Kammer kräftig, um die anhaftenden Zellen zu lösen, wodurch virushaltige Zellen und extrazelluläre Viruspartikel in das Medium freigesetzt werden.
Überführen Sie den Inhalt in ein Reagenzglas und zentrifugieren Sie, um die virushaltigen Zellen zu pelletieren.
Sammeln Sie das Überstand enthaltende extrazelluläre Virus und überführen Sie es in eine Lagervorrichtung.
Lösen Sie das Pellet in Puffer auf und inkubieren Sie es.
Enzyme und Detergenzien im Puffer lysieren die Zellen und setzen intakte intrazelluläre Viren in die Lösung frei.
Zentrifugieren Sie das Lysat, um den zellulären Abfall zu pelletieren. Sammeln Sie das Überstandsvirus und geben Sie es zu dem gleichen Aufbewahrungsbehälter hinzu, der das extrazelluläre Virus enthält.
Bewahren Sie die ungeklärte virale Suspension bei niedriger Temperatur auf, bis eine weitere Reinigung erfolgt.
Nach der Inkubation die Zellkulturkammer kräftig schütteln, um die Zellen zu lösen, bis das Medium trüb erscheint, und in vier 500-Milliliter-Z
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