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Mikrobiologie
0 Aufrufe • 3:35 Min. • August 31st, 2026
Beginnen Sie mit einem filtrierten Zelllysat, das adeno-assoziierte Virusvektoren (AAV) und vom Wirt stammende Verunreinigungen enthält.
Lysat durch eine Heparin-basierte Affinitäts-Säule leiten.
Die viralen Kapsidproteine binden elektrostatisch an die negativ geladenen Heparin-Gruppen.
Spülen Sie die Säule mit einem Puffer, um nicht gebundene Verunreinigungen zu entfernen.
Ein Puffer, der ein Tensid enthält, wird zugegeben, um membranöses Zelltrümmermaterial aufzulösen.
Nochmals mit dem detergentfreien Puffer spülen.
Führen Sie einen mit Kationen angereicherten Puffer ein, um ein ionisches Milieu zu schaffen, und waschen Sie anschließend mit einem Puffer mit mäßiger Salzkonzentration, um schwach gebundene Verunreinigungen freizusetzen.
Fügen Sie einen Puffer mit hohem Salzgehalt hinzu, um die Wechselwirkungen zwischen Kapsid und Heparin zu stören und die viralen Partikel zu eluieren.
Sammeln Sie die Elutionsfraktionen, die angereicherte intakte Viruspartikel enthalten, und überführen Sie sie in Zentrifugalkonzentratoren mit Filtermembranen.
Zentrifugieren Sie die Röhrchen, um überschüssiges Pufferlösung zu entfernen, und sammeln Sie die konzentrierten viralen Fraktionen in einem Röhrchen.
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