Lentiviral-Vektor-basierte Transduktion von befruchteten Rattenembryonen
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Mikrobiologie
0 Aufrufe • 3:07 Min. • August 31st, 2026
Nehmen Sie eine Mikroinjektionsschale mit einem Tropfen Embryokulturmedium in der Mitte, der mit Mineralsöl bedeckt ist, um Verdunstung zu verhindern.
Stellen Sie die Schale unter ein inverses Mikroskop.
Platzieren Sie eine Mikroinjektionskapillare und eine Haltepipette an einem Mikromanipulator-Setup unter dem Mikroskop.
Die Mikroinjektionskapillare wird mit einer Suspension von Lentiviren-Vektoren, die das Transgen tragen, beladen.
Anschließend befruchtete Rattenembryonen in das Medium überführen.
Befestigen Sie ein Embryo mit der Haltepipette, indem Sie Saugkraft anwenden.
Unter höherer Vergrößerung die Mikroinjektionskapillare durch die extrazelluläre Glykoproteinhülle des Embryos, die Zona pellucida, einführen und die Lentivirus-Suspension in den perivitellinen Raum injizieren.
Anschließend die injizierten Embryonen in eine Kulturschale überführen und inkubieren.
Das Virus dringt in das Embryo ein und setzt sein Genom, das das Transgen enthält, in das Zytoplasma frei.
Anschließend wird es revers transkribiert in DNA und integriert sich in das Genom des Embryos, wodurch das Transgen eingefügt wird.
Die transduzierten Embryonen sind nun bereit für die Verarbeitung.
Für die Mikroinjektion v
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