JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Mikrobiologie
0 Aufrufe • 3:25 Min. • September 30th, 2026
Verwenden Sie eine Mehrfach-Well-Platte, die Säuger-Epithelzellen enthält.
Bereiten Sie serielle Verdünnungen eines Pseudovirus vor, das Coronavirus-Spikeproteine enthält.
Ersetzen Sie das Medium in jedem Brunnen durch eine verdünnte virale Suspension.
Inkubieren Sie gelegentlich unter Schütteln, um die Bindung der viralen Spike-Proteine an den Wirtszellrezeptor zu ermöglichen.
Entfernen Sie das Medium. Geben Sie ein Medium mit Methylcellulose hinzu, um eine halbfeste Überlagerung zu bilden, die die Virusausbreitung einschränkt, und inkubieren Sie.
Das Virus dringt in die Zelle ein und setzt sein RNA-Genom frei.
Die RNA leitet die Synthese neuer viraler RNA und Proteine an, die sich zu viralen Partikeln zusammenlagern, die die Zelle verlassen.
Die freigesetzten Viren infizieren benachbarte Zellen und erzeugen eine klare Zone, die als Plaque bezeichnet wird.
Entfernen Sie die Überlagerung und waschen Sie die Zellen.
Fügen Sie einen Farbstoff hinzu und inkubieren Sie die Platte unter Schütteln.
Spülen und trocknen Sie die Vertiefungen.
Der Farbstoff färbt die Zellen, während die Plaques klar bleiben.
Zählen Sie die sichtbaren Plaques in jedem Well, um die virale Konzentration zu bestimmen.
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