Antikörpervermittelte Neutralisation von Pseudoviren, die das Coronavirus-Spike-Protein exprimieren, unter Verwendung von Patientenserum

Nehmen Sie eine Mehrfach-Well-Platte mit hitzeinaktiviertem Patientenserum, das koronavirusspezifische Antikörper im Test-Well enthält. Fügen Sie gesundes menschliches Serum als Kontrolle hinzu.

Fügen Sie Pseudoviren, die Coronavirus-Spikeproteine exprimieren und RNA codierend für grün fluoreszierendes Protein tragen, den Serumproben hinzu und inkubieren Sie sie.

In der Testprobe binden Antikörper an die Spike-Proteine und neutralisieren die Pseudoviren, während in der Kontrollprobe unspezifische Antikörper nicht an die Spike-Proteine binden und die Pseudoviren ungebunden bleiben.

Fügen Sie die Mischung zu Epithelzellmonolagen hinzu. Inkubieren Sie zur viralen Adsorption.

Fügen Sie halbfestes Übertragungsmittel zu jedem Brunnen hinzu, um die Virusdiffusion einzuschränken. Inkubieren Sie.

Bei der Kontrolle binden nicht gebundene Pseudoviren an Zellrezeptoren, dringen in die Zellen ein, setzen RNA frei und exprimieren GFP, wodurch fluoreszierende Infektionsherde entstehen.

In der Testprobe können antikörperneutralisierte Pseudoviren keine Zellen infizieren, wodurch die Bildung von Infektionsherden verhindert wird.

Zählen Sie unter einem fluoreszierenden Bildgebungsgerät die fluoreszierenden