JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Mikrobiologie
0 Aufrufe • 4:09 Min. • September 30th, 2026
Beginnen Sie mit einer Mehrfachplatte, die Säugerzellen enthält, die einem rekombinanten Vaccinia-Virus ausgesetzt wurden.
Das rekombinante Virus kodiert für grünes, rotes und blaues fluoreszierendes Protein, wobei jeweils ein stadienspezifischer Promotor die frühen, intermediären und späten Stadien der Genexpression verfolgt.
Das Virus gelangt über die rezeptorvermittelte Endozytose in die Zelle und setzt seinen viralen Kern in das Zytoplasma frei.
Die Transkriptionsmaschinerie im viralen Kern treibt die frühe Genexpression an, gekennzeichnet durch grüne Fluoreszenz.
Frühproteine vermitteln die Desintegration der Genomhülle und setzen virale DNA im Zytoplasma frei, wo die DNA-Polymerase das virale Genom repliziert.
Danach führt die Expression von intermediären Genen, gekennzeichnet durch rote Fluoreszenz, zur Produktion von Transkriptionsfaktoren, die für die Aktivierung von späten Genen essentiell sind.
Anschließend erzeugt die späte Genexpression, gekennzeichnet durch blaue Fluoreszenz, strukturelle Proteine, die für die Bildung reifer Virionen notwendig sind.
Fügen Sie ein Fixativ hinzu und inkubieren Sie kurz, um die Fluoreszenz zu erhalten.
Entfernen Sie das Fixativ und geben Sie dan
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