Luciferase-basierter Assay zur Evaluierung antiviraler Verbindungen in menschlichen embryonalen Nierenzellen

Beginnen Sie mit einer Mehrlochplatte, die eine serielle Verdünnung der Testverbindung zur Beurteilung der antiviralen Aktivität enthält.

Fügen Sie eine Suspension menschlicher embryonaler Nierenzellen, die rekombinantes Masernvirus exprimierendes Luciferase enthält, in jede Vertiefung hinzu.

Inkubieren, um den Zellen die Anheftung an den Boden jedes Wells zu ermöglichen.

In der Kontrollprobe ohne Testverbindung fusioniert das Virus mit der Zellmembran und setzt sein Genom in das Zytoplasma frei.

Das virale Genom steuert die Produktion von viraler RNA und Proteinen sowie des Reportergenproteins Luciferase.

In den Testgefäßen hemmt die antivirale Verbindung die Virusreplikation und verringert die Produktion von Luciferase.

Fügen Sie ein für Luciferase spezifisches Substrat zu jedem Well hinzu, das mit der Luciferase interagiert und Lumineszenz emittiert.

Verwenden Sie einen Plattenreader, um die Lumineszenzintensität in jedem Well zu messen.

Eine geringere Lumineszenz in den Testansätzen im Vergleich zum Kontrollansatz zeigt eine virale Hemmung an.

Ein fortschreitender Rückgang der Lumineszenz mit steigender Verbindungskonzentration zeigt eine dosisabhängige Hemmung der Virusreplikation.

Füg