Isolierung eines einzelnen Riesenvirus aus einer gemischten Viruspopulation unter Verwendung von Amöben

Beginnen Sie mit Amöben, die in einem Nährstoff-armen Medium mit antimikrobiellen Wirkstoffen kultiviert wurden, um Kontaminationen zu verhindern. Amöben dienen als empfängliche Wirte für Riesenviren.

Fügen Sie eine verdünnte virale Suspension hinzu, die eine gemischte Population aus zwei Riesenviren enthält.

Stellen Sie die Kulturschale in einen Beutel, um die Verdunstung des Mediums zu verhindern, und inkubieren Sie sie.

Die Virusverdünnung erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass jede Amöbe auf einen einzigen Typ von Riesenvirus trifft.

Die Amöben nehmen die Viren auf, die intrazellulär replizieren, wodurch infizierte Zellen sich verändern und ablösen, was zytopathische Effekte hervorruft.

Überwachen Sie die Kultur unter einem Lichtmikroskop, um zytopathische Anzeichen zu bestätigen.

Danach die Schale auf den Objekttisch eines invertierten Mikroskops übertragen.

Positionieren Sie eine Mikrokappe auf einem Mikromanipulator unter dem umgekehrten Mikroskop. Die Mikrokappe enthält biokompatibles Mineralöl zur kontrollierten Zellaspiration.

Unter Verwendung der Mikrokapi­lle vorsichtig eine einzelne, runde, infizierte Zelle ansaugen und in eine frische Amöbenkultur freisetzen. Inkubieren.

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