Evaluierung der immunmodulatorischen Aktivität eines viral kodierten bispezifischen T-Zell-Engagers

Beginnen Sie mit einem Testansatz, der genetisch modifizierte Tumorzellen enthält, die ein Zielantigen exprimieren, sowie einem Kontrollansatz mit Tumorzellen, die das Antigen nicht exprimieren.

Nehmen Sie einen bispezifischen T-Zell-Engager (BTE), der durch ein virales Transgen kodiert wird und über zwei Bindungsstellen verfügt, eine für das Zielantigen und eine weitere für einen T-Zell-spezifischen Rezeptor.

Fügen Sie den BTE und die T-Zellen den Vertiefungen hinzu und inkubieren Sie sie.

Im Testprobenansatz verknüpft der BTE Tumor- und T-Zelle miteinander und aktiviert dadurch die T-Zelle, zytolytische Granula freizusetzen.

Dadurch wird die Tumorzelle lysiert, wodurch ein intrazelluläres Enzym freigesetzt wird.

Im Kontrollansatz bindet der BTE ausschließlich an die T-Zelle und verhindert so die Lyse der Tumorzelle.

Zentrifugieren und das Überstand aufsammeln.

Fügen Sie ein Substrat hinzu und inkubieren Sie.

Das Enzym katalysiert das Substrat zu einem rot gefärbten Produkt.

Fügen Sie eine Stopplösung hinzu und messen Sie die Farbintensität.

Eine höhere Intensität in der Testprobe bestätigt die zielgerichtete immunmodulatorische Aktivität des BTE.

Um die BTE-induzierte, zellvermittelte Zytot