Fluoreszenzbasierte Sortierung einzelner Viruspartikel für die genomische Analyse

Verwenden Sie eine Suspension, die ein vielfältiges Gemisch aus Viren sowie Kontaminanten wie defekte Viruspartikel ohne Nukleinsäuren enthält.

Diese Viren sind vorab mit einem fluoreszierenden Farbstoff, der an Nukleinsäuren bindet, gefärbt, um Viren mit Genomen von Kontaminationen zu unterscheiden.

Leiten Sie die Suspension durch einen fluoreszenzaktivierten Zellsortierer, bei dem jedes Partikel hinsichtlich Lichtstreuung und Fluoreszenzintensität analysiert wird.

Das Lichtstreuungssignal spiegelt die Partikelgröße wider, während die Fluoreszenzintensität den Nukleinsäuregehalt anzeigt.

Schließen Sie Kontaminanten aus, die keine Fluoreszenz zeigen, und Aggregate, die abnorm hohe Fluoreszenz aufweisen.

Wählen Sie einzelne Viruspartikel aus, die ein Genom enthalten, und sortieren Sie sie direkt auf eine mit Agarose beschichtete Kammerobjektträger zur Immobilisierung.

Überdecken Sie jedes Loch mit zusätzlichem Agarose, um die Viren einzubetten.

Diese sind nun bereit für die Amplifikation und Analyse einzelner Virusgenome.

Um Viren mithilfe eines Durchflusszytometers, das mit benutzerdefinierten Photomultiplierröhren für das Vorwärtsstreulicht (FSC-PMT) ausgestattet ist, zu sortieren, verdün