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Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:37 Min. • September 30th, 2026
Beginnen Sie mit einem Überstand aus einer Säugetierzellkultur, der Hepatitis-C-Virus enthält.
Verdünnen Sie die virale Suspension nacheinander im Wachstumsmedium.
Inokulieren Sie jede Verdünnung auf eine Monoschicht von Hepatomzellen und inkubieren Sie diese.
Das Virus dringt in die Zellen ein, setzt sein Genom frei und exprimiert virale Proteine, einschließlich des nichtstrukturellen Replikationsproteins.
Dadurch entstehen neue virale Partikel, die ausgewachsen werden und benachbarte Zellen infizieren, wodurch sich ein Herd infizierter Zellen bildet.
Nach der Inkubation das Medium entfernen und ein Fixierungsmittel hinzufügen. Zur Fixierung der Zellen und Permeabilisierung der Membran bei kalter Temperatur inkubieren.
Waschen und einen Blockierpuffer hinzufügen, um eine unspezifische Antikörperbindung zu verhindern.
Fügen Sie primäre Antikörper hinzu, die an das nichtstrukturelle Replikationsprotein binden.
Waschen, um nicht gebundene Antikörper zu entfernen.
Dann fügen Sie fluorophor-markierte sekundäre Antikörper hinzu, die an die primären Antikörper binden.
Nochmals waschen, um ungebundene Antikörper zu entfernen. Einen DNA-Bindungsfarbstoff hinzufügen, um die Kerne anzufärben.
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