JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Mikrobiologie
0 Aufrufe • 3:35 Min. • September 30th, 2026
Nehmen Sie Kulturen von Säugetierzellen. Infizieren Sie die Testkultur mit einem Virus, während die Kontrolle unbehandelt bleibt.
Lassen Sie die Virusadsorption zu, dann ersetzen Sie das Medium.
Das Virus dringt in die Zelle ein und setzt sein Genom frei. Das Virus exprimiert ein Virulenzprotein, das die Komplexe der Wirtstranskriptionsfaktoren destabilisiert und die Wirtstranskription unterdrückt.
Die Kontrollzellen weisen jedoch eine aktive Transkription auf.
Fügen Sie ein Nukleosidanalogon hinzu, das in neu synthetisierte RNAs eingebaut wird.
Die gewaschenen Zellen gewinnen.
Fixieren Sie die Zellen, um deren Struktur zu erhalten. Zentrifugieren Sie die Zellen und waschen Sie sie mit einem Puffer.
Fügen Sie ein Detergens hinzu, um die Zellen zu permeabilisieren, und waschen Sie anschließend.
Fügen Sie einen chemisch modifizierten fluoreszierenden Farbstoff hinzu, der mit dem Nukleosidanalogon reagiert, um neu synthetisierte RNAs zu markieren; anschließend waschen.
Führen Sie eine Immunfärbung durch, um virale Antigene fluoreszenzmarkiert darzustellen und infizierte Zellen zu kennzeichnen.
Verwenden Sie die Durchflusszytometrie, um die Fluoreszenz von Wirt-RNA und viralem Antigen nachzuwei
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