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Mikrobiologie
0 Aufrufe • 3:36 Min. • September 30th, 2026
Beginnen Sie mit einer Kultur menschlicher Nierenepithelzellen, die in einem nährstoffreichen Medium gezüchtet wurden.
Ersetzen Sie das Medium durch ein Medium mit reduziertem Serumgehalt, um störende Einflüsse des Serums zu minimieren und die Transfektionseffizienz zu verbessern.
Fügen Sie die Transfektionsmischung tropfenweise den Zellen hinzu.
Die Mischung enthält einen retroviralen DNA-Konstrukt, der das Gen der Interesse trägt, ein Verpackungsplasmid, das essentielle virale Proteine bereitstellt, und Polyethylenimin, das Komplexe mit der Plasmid-DNA bildet, um die Transfektion zu erleichtern.
Inkubieren Sie die Zellen, um die Aufnahme des DNA-Komplexes zu ermöglichen.
Ersetzen Sie das Medium, um restliche Transfektionsreagenzien zu entfernen.
Im Inneren der Zelle gelangt die Plasmid-DNA in den Zellkern, wo sie die Produktion viraler Proteine und viraler RNA, die das Gen von Interesse trägt, steuert.
Diese Komponenten lagern sich zusammen und buddeln in das Medium als rekombinante retrovirale Partikel aus.
Sammeln Sie das virusenthaltende Medium und lagern Sie es vorübergehend bei niedriger Temperatur, um die virale Stabilität zu gewährleisten.
Zentrifugieren, um den zellulären Bruch zu
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