JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:31 Min. • September 30th, 2026
Beginnen Sie mit einer Mehrfachplatte, die epitheliale Zellen enthält, die mit einem genetisch modifizierten Virus infiziert wurden.
Das Virus trägt ein Transgen, das ein Luciferase-Enzym kodiert.
Nehmen Sie frische Kulturen von Epithelzellen in einer mehrschlitzigen Platte mit weißen Wänden.
Überführen Sie das Überstandsgemisch mit unbekannten Viruskonzentrationen in die weißwandigen Vertiefungen.
Gleichzeitig bekannte Konzentrationen des Virus als Standards hinzufügen.
Zentrifugieren Sie die Platte, um einen engen Kontakt zwischen den Viruspartikeln und den Wirtszell-Oberflächenrezeptoren herzustellen, und inkubieren Sie sie.
Das Virus dringt in die Wirtszelle ein und überträgt sein RNA-Genom mit negativer Polarität.
Die virale RNA-Polymerase transkribiert anschließend das Genom in mRNA.
Unter Verwendung der zellulären Maschinerie der Wirtszelle wird die mRNA in virale Proteine, einschließlich Luciferase, übersetzt.
Die Menge an in der Wirtszelle angesammeltem Luciferase steigt mit zunehmender Viruskonzentration an.
Die Proben sind bereit für die weitere Bestimmung der viralen Konzentrationen mithilfe des Luciferase-Assays.
Stellen Sie eine Standardkurve von VSV-Delta-51 in serumfreiem DME
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