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Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:53 Min. • September 30th, 2026
Beginnen Sie mit epithelialen Zellen, die mit Vacciniavirus infiziert und mit einem Rekombinationsplasmidvektor transfiziert wurden.
Der Vektor trägt ein grün fluoreszenzmarkiertes Zielgen und ein rot fluoreszenzmarkiertes metabolisches Selektionsgen unter einer viralen Promotorsequenz.
Während der viralen DNA-Replikation wird die Plasmidkassette in das virale Genom eingefügt.
Sammeln Sie die Zellen in serumfreiem Medium.
Verwenden Sie Gefrier-Tau-Zyklen, um die Zellen zu lysieren und die Viren freizusetzen.
Bereiten Sie serielle Verdünnungen des Lysats vor.
Infizieren Sie frische epitheliale Zellen mit dem verdünnten Lysat, um separate einzelne Plaques zu erhalten.
Fügen Sie Medium mit Serum für das Zellüberleben und ein metabolisches Selektionsreagenz hinzu und inkubieren Sie.
Das Selektionsreagenz hemmt Enzyme, die an der Nukleotidsynthese beteiligt sind. Nur infizierte Zellen, die das metabolische Selektionsgen tragen, exprimieren ein alternatives Enzym, das die Nukleotidsynthese ermöglicht und somit das Überleben erlaubt.
Entfernen Sie das Medium und untersuchen Sie es unter einem Fluoreszenzmikroskop.
Das Vorhandensein von roter und grüner Fluoreszenz in einer Plaque zeigt eine erfolgr
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