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Mikrobiologie
0 Aufrufe • 3:27 Min. • September 30th, 2026
Beginnen Sie mit Suspensionen mutierter Virus-ähnlicher Partikel (VLPs), die aus infizierten Tabakblättern gereinigt wurden.
Die mutierten VLPs enthalten an spezifischen Positionen in dem viralen Hüllprotein genetisch eingefügte Cysteinreste.
Fügen Sie einen maleimidkonjugierten fluoreszierenden Farbstoff hinzu und inkubieren Sie die Mischung im Dunkeln.
Das Maleimid bindet ausschließlich an die auf der VLP-Oberfläche exponierten Cysteinreste, während innerhalb der Proteinstruktur vergrabene Cysteine unzugänglich bleiben und unlabeled verbleiben.
Ein Reduktionsmittel hinzufügen, um verbleibende Farbstoffe zu blockieren und unspezifische Markierungen zu verhindern.
Laden Sie die Proben in Entsalzungssäulen, die mit einem porösen Harz gefüllt sind, und zentrifugieren Sie, um die markierten VLPs zu reinigen.
Die nicht reagierten Farbstoffe und Reduktionsmittel diffundieren in die porösen Harzperlen ein und werden dort zurückgehalten, während die größeren VLPs von den Poren ausgeschlossen werden und zuerst eluieren.
Die fluoreszenzmarkierten VLPs können nun mittels Gelelektrophorese analysiert werden.
Fluoreszierende Banden im Gel zeigen markierte Mutanten mit oberflächenexponierten Cysteinres
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