Produktion von virusähnlichen Partikeln in modifizierten E. coli

Nehmen Sie ein Reagenzglas, das eine Startkultur aus modifizierten E. coli-Zellen enthält, die das durch den lac-Operator regulierte T7-Polymerase-Gen sowie ein Expressionsplasmid tragen.

Das Plasmid trägt ein Gen, das für ein Hüllprotein stammt aus dem Bakteriophagen Qβ codiert.

Dieses Gen wird durch einen T7-Promotor und einen lac-Operator reguliert.

Überführen Sie die Kultur in einen Kolben, der ein Nährmedium enthält.

Unter Schütteln inkubieren, um das bakterielle Wachstum zu fördern.

Fügen Sie einen synthetischen Analogon von Allolactose hinzu, das den lac-Repressor inaktiviert und dadurch die Expression der T7-Polymerase auslöst.

Die T7-Polymerase bindet anschließend an den T7-Promotor auf dem Plasmid und transkribiert das Hüllprotein-Gen, das zur Produktion des Hüllproteins translational übersetzt wird.

Diese Hüllproteine lagern sich spontan zu virusähnlichen Partikeln (VLPs) zusammen, die nicht infektiöse Gerüste bilden.

Überführen Sie die Kultur in Zentrifugenröhrchen.

Zentrifugieren, um die Zellen zu pelletieren.

Verwerfen Sie den Überstand und überführen Sie das Pellet in ein Röhrchen.

Das Zellpellet, das intrazelluläre VLPs enthält, ist bereit für die Reinigung.

Wischen Sie vor Beg