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Mikrobiologie
0 Aufrufe • 3:51 Min. • September 30th, 2026
Beginnen Sie mit virusähnlichen Partikeln (VLPs), die Disulfidbrücken auf der Oberfläche des Kapsids aufweisen.
Fügen Sie ein Reduktionsmittel hinzu, um die Disulfidbindungen zu spalten und freie Thiolgruppen zu bilden, wobei die Kapsidstruktur erhalten bleibt.
Kombinieren Sie die reduzierten VLPs mit einem thiolreaktiven Polyethylenglykol oder PEG-Linker, um eine Thiolreoxidation zu verhindern.
Der PEG-Linker verknüpft jedes Thiolpaar erneut, indem er zwei kovalente Bindungen ausbildet.
Diese kovalente Konjugation bildet auch eine fluoreszierende Struktur, die unter UV-Beleuchtung hellgelb erscheint.
Drehen Sie die Mischung über einen längeren Zeitraum, um eine vollständige Konjugation zu ermöglichen.
Reinigen Sie die PEGylierten VLPs mithilfe der Zentrifugalfiltration, indem Sie nicht umgesetzte kleine Moleküle entfernen und intakte Konjugate zurückhalten.
Führen Sie eine nichtreduzierende SDS-PAGE durch, um die PEG-Anlagerung nachzuweisen, die durch ein fluoreszierendes Band des Hüllproteins angezeigt wird.
Überprüfen Sie die strukturelle Integrität mittels nativer Agarose-Gelelektrophorese, bei der ähnliche Banden für PEGylierte und nicht-PEGylierte VLPs das Vorhandensein intakter VLPs
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