JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Mikrobiologie
0 Aufrufe • 3:06 Min. • September 30th, 2026
Beginnen Sie mit einer anhaftenden, viruspermissiven Zellmonoschicht.
Waschen Sie die Zellen und geben Sie dann ein Dissoziierungsmedium hinzu, um sie zu lösen.
Zentrifugieren und den Überstand verwerfen. Die Zellen waschen, um das restliche Medium zu entfernen.
Suspendieren Sie die Zellen in gepuffertem Salz, und überführen Sie die Zellen dann in eine Küvette.
Führen Sie RNA ein, die aus einem vollständigen cDNA-Klon des japanischen Enzephalitisvirus (JEV) transkribiert wurde und in einem bakteriellen künstlichen Chromosom vorliegt.
Elektrische Impulse anwenden, um die Zellmembran vorübergehend permeabel zu machen und dem RNA-Eintritt zu ermöglichen.
Lassen Sie die Zellen regenerieren und überführen Sie sie dann in ein Kulturmedium.
Die eingeführte RNA ahmt native virale RNA nach, um neue Virionen zu produzieren.
Verdünnen Sie die Zellen seriell und geben Sie sie auf frische Zellmonolagen.
Inkubieren Sie, um den Virionen die Infektion benachbarter Zellen zu ermöglichen.
Mit Agarose-Medium überdecken und inkubieren. Das Medium bildet eine halbfeste Schicht, die die Ausbreitung des Virus auf benachbarte Zellen beschränkt.
Die infizierten Zellen lysieren und bilden diskrete Plaques, was die er
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