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Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:36 Min. • September 30th, 2026
Beginnen Sie mit einem rekombinant exprimierten, RNA-freien Nukleoprotein-Phosphoprotein-Komplex, der spezifisch für ein Virus ist.
Incubieren Sie den Komplex mit virus-spezifischen RNA-Oligonukleotiden, um die Assemblierung nukleokapsidähnlicher Partikel einzuleiten.
Während der Assembly verdrängt die virale RNA das Phosphoprotein-Fragment, wodurch das Nukleoprotein die RNA umschließen und nukleokapsidähnliche Partikel bilden kann.
Zentrifugieren Sie die Probe, um eventuelle Präzipitate zu entfernen.
Nehmen Sie eine vorgleichgestellte Größenausschlusschromatographiesäule, die mit einem porösen Harz gepackt ist, und geben Sie das Überstand auf diese auf.
Während die Probe durch die Säule fließt, werden große Nukleokapsid-Komplexe von den Poren ausgeschlossen und zuerst eluiert.
Mittlere Proteinkomplexe und kleine RNA-Moleküle passieren die Poren und eluieren später.
Überwachen Sie die Absorption des Eluats, um ein Elutionsprofil mit deutlichen Peaks zu erzeugen.
Der erste Peak zeigt zusammengesetzte Nukleokapside, gefolgt von kleineren Protein-Komplexen und freier RNA.
Sammeln Sie die Fraktion, die dem Nukleokapsid-Gipfel entspricht, zur Validierung und weiteren Analyse.
Für die virus-spezif
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