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Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:37 Min. • September 30th, 2026
Beginnen Sie mit einer Mehrfachplatte, die epitheliale Zellen enthält, die mit dem Zika-Virus, einem einzelsträngigen RNA-Virus, infiziert wurden.
Während der Infektion setzt das Virus die RNA frei, die ein doppelsträngiges RNA- oder dsRNA-Zwischenprodukt bildet.
Um diese dsRNA-Zwischenprodukte nachzuweisen, ersetzen Sie das Medium durch Methanol, um die Zellen zu permeabilisieren und die zelluläre Integrität zu bewahren.
Entfernen Sie das Methanol und waschen Sie mit einem Puffer.
Fügen Sie eine Blockierungslösung hinzu, um eine unspezifische Antikörperbindung zu verhindern.
Fügen Sie einen primären Antikörper hinzu, der spezifisch für virale dsRNA ist.
Bei niedriger Temperatur unter leichtem Schwenken inkubieren, um die Bindung des primären Antikörpers an die virale dsRNA zu ermöglichen.
Spülen Sie mit einem Puffer, geben Sie einen mit einem roten Fluorophor konjugierten sekundären Antikörper hinzu und inkubieren Sie.
Die sekundären Antikörper binden an die primären Antikörper.
Spülen Sie mit einem Puffer und geben Sie dann einen fluoreszierenden DNA-Bindungsfarbstoff zur Färbung des Zellkerns hinzu.
Unter einem Fluoreszenzmikroskop beobachten, um das markierte virale dsRNA-Zwischenprodukt
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