Konzentrierung und Aufreinigung von viralen Partikeln

Nehmen Sie eine Suspension von viralen Partikeln, die mit Wirtszelltrümmern vermischt ist.

Zentrifugieren Sie die Probe, um die größeren Partikel zu pelletieren. Sammeln Sie den Überstand, der die viralen Partikel zusammen mit kleineren Verunreinigungen enthält.

Filtern Sie das Überstand, um die verbleibenden kleineren Partikel zu entfernen.

Geben Sie eine Salzlösung, die Polyethylenglykol oder PEG enthält, zum Filtrat hinzu. Drehen Sie das Röhrchen um, um es zu mischen, und inkubieren Sie es.

PEG wirkt als molekularer Überfüllungsagent, der die viralen Partikel näher zueinander drängt und dadurch deren Ausfällung fördert.

Gleichzeitig verstärkt das Salz diesen Effekt, indem es die elektrostatische Abstoßung zwischen den viralen Partikeln neutralisiert und dadurch deren Aggregation ermöglicht.

Zentrifugieren Sie das Röhrchen, um die viralen Aggregate zu pelletieren. Entsorgen Sie das PEG-reiche Überstand.

Wiederholen Sie die Zentrifugation und verwerfen Sie jegliches restliches Überstand.

Fügen Sie einen Puffer hinzu und inkubieren Sie unter Schütteln, um das Pellet erneut in Lösung zu bringen.

Pipettieren Sie die Suspension, die virale Partikel enthält, in Aliquots und lagern Sie sie bei