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Mikrobiologie
0 Aufrufe • 4:33 Min. • September 30th, 2026
Nehmen Sie eine Mehrfachbrunnenplatte mit Epithelzell-Monolagen und geben Sie eine virale Suspension in die Brunnen.
Inkubieren Sie unter gelegentlichem Schwenken, um die Viren gleichmäßig zu verteilen. Die Viren binden an die Zellen und dringen in diese ein.
In einer Vertiefung fügen Sie geschmolzenes Agarose hinzu, das zu einer halbfesten Überlagerung erstarrt.
In einer anderen Vertiefung ein viskoses Überlagerungsmedium auf Basis von mikrokristalliner Cellulose hinzufügen und inkubieren. Seine Viskosität beschränkt die virale Diffusion, ähnlich wie bei der halbfesten Überlagerung.
Innerhalb der Zelle setzt das Virus sein Genom frei und produziert neue virale RNAs und Proteine.
Neue Viren lagern sich zusammen, verlassen die Zellen und verursachen eine Zelllyse.
Freigesetzte Viren infizieren benachbarte Zellen und bilden Plaques.
Entfernen Sie die flüssige Überlagerung durch Aspiration und geben Sie ein Fixativ hinzu, um die nicht lysierten Zellen zu erhalten.
Entsorgen Sie das Fixiermittel und entfernen Sie die Agarose-Überlagerung.
Fügen Sie einen Farbstoff hinzu, der lebensfähige Zellen anfärbt und die Plaques ungefärbt lässt. Anschließend spülen Sie den überschüssigen Farbstoff ab.
Die
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