Name: Präparation einer Maus Eye für einen ganzen Berg von retinalen Pigmentepithel (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-27T16:00:00.000+00:00
Duration: 16 min 47 s
Description: Lernen Sie die Präparation eines Mausauges für ein Whole Mount des retinalen Pigmentepithels. Diese Technik ermöglicht die Untersuchung der Netzhautentwicklung und retinaler Erkrankungen.

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Diese Arbeit wurde vom National Institute of Environmental Health Sciences unterstützt [K22ES012264 zu AJRB] und einem American Cancer Society InstitutionalResearch Grant [ACS-IRG-00-173 bis 04] Pilot projectaward [zum AJRB]. Wir danken auch Mitglieder der Bishop-Labor für die kritische Durchsicht des Manuskripts und Kommentare auf der Video-und Adam Brown insbesondere für das Beispiel von dem, was nicht zu tun. Wir danken Dr. Donald McEwen von Greehey Kinder-Krebs-Forschung für die Erlaubnis der Verwendung seiner Binokular / Video-Kamera Set-up für die Dreharbeiten der Dissektion Video. Wir bedanken uns bei Daron Brown in Corte Instruments zum Schärfen und Reparatur unserer Mikrodissektion Werkzeuge.

1. Entfernen Fremdwasser Gewebe von der Außenseite des Auges <ol><li> Gießen 1X PBS in den Deckel eines 35-mm-Schale. Das Niveau sollte knapp unterhalb der Lippe des Deckels werden. </li><li> Mit geraden Zangen, Transfer Auge (n) aus der Lagerung Rohr auf die 35mm Gericht. 1: Die Augen sind in PBS aus zwei Gründen unter Wasser. Der fremde Gewebe wird "float" vom Auge weg, so dass Sie sehen können, und entfernen Sie sie einfach, und 2. Während Dissektion, wird das Auge natürlich pflegen ihre Kugelform, während in der Schwebe, so dass Sie mit dieser Form eher als Arbeit gegen sie. </li><li> Mit beiden Paare von abgewinkelten Pinzette (45 ° und 15 °), sanft wie viel Muskel-und Bindegewebe wie möglich zu entfernen, ziehen das Gewebe gegen den Strich (also in Richtung der Hornhaut). Einige Bindegewebe bleibt. Dabei sollte nach den Augapfel so wenig wie möglich unter Druck zu setzen. </li><li> Handeln Sie Ihre 15 ° Zange für das Frühjahr Schere. Halten Sie das Auge ständig mit 45 ° Zange, mit der Feder Schere wegschneiden verbleibenden Muskel-und Bindegewebe sowie den Sehnerv. * Tipp: Verwenden Sie den äußeren Rand der Schere, um das Gewebe gegen den Strich schieben (in Richtung der Hornhaut-Sklera-teilen) und dann zu trimmen. Fort, bis alle fremden Gewebe aus dem Auge entfernt worden. </li></ol> 2. Entfernen Sie die Hornhaut und Linse <ol><li> Mit der Hornhaut nach oben, die 45 ° Zange kneifen eine kleine Falte in der Mitte der Hornhaut. </li><li> Mit dem Frühling Schere, einen kleinen Schnitt an der Basis der Klappe. Lassen Sie die Klappe. </li><li> Halten Sie die Augen noch mit einer Pinzette, legen Sie die untere Scherenblatt in und senkrecht zur Schnitt-und einen Schnitt in Richtung der Corneo-Sklera teilen. Versuchen Sie, Ihre Untermesser unter der Iris zu halten, damit sowohl die Hornhaut und Iris geschnitten werden. Schneiden Sie nicht den ganzen Weg auf die Hornhaut-Sklera-teilen. Halten einer Schere in das Auge eingesetzt. </li><li> Mit Ihren 45 ° Pinzette vorsichtig drehen das Auge, so dass die Schere parallel zur Hornhaut-Sklera trennen sind und machen einen kleinen Schnitt. Drehen Sie langsam den Blick um 360 °, so dass kleine Schnitte rundum. Auch hier versuchen, die untere Klinge Ihrer Feder Schere unter der Iris zu halten, damit sowohl die Iris und Hornhaut geschnitten werden. Heben Sie die Iris und Hornhaut weg vom Rest des Auges und werfen Sie sie weg. </li><li> Kippen Sie das Auge auf die Seite und drücken Sie sanft auf der hinteren Hälfte des Auges, wodurch der Linse aus. Entsorgen Sie das Objektiv. Das Innere des verbleibenden Augenmuschel ist durch das neuronale Netzhaut, die glatt und undurchsichtig sollten ausgekleidet. </li></ol> 3. Quarter die daraus resultierenden Augenmuschel, was zu einem 4 - "petaled" Blume-ähnliche Struktur <ol><li> Das Auge soll so positioniert, dass die Öffnung der Augenmuschel senkrecht auf den Körper sein. Verwenden Sie Ihre 45 ° Zange zu stabilisieren und die Position der Augenmuschel. </li><li> Halten Sie Ihre Feder Schere vor Ihnen, so dass sie senkrecht stehen, um Ihren Körper, legen Sie die untere Klinge Ihrer Feder Schere in die obere Kante der offenen Augenmuschel. Mit Ihren 45 ° Zange, richten Sie die Augenmuschel, so dass einem einzigen geraden Schnitt aus der Corneo-Sklera-Kluft in Richtung des Sehnervenkopfes gemacht werden kann. Alle Schnitte sollten senkrecht zur Hornhaut-Sklera-teilen und sofern nicht anders angegeben, gehen sollte möglichst nahe an den Sehnervenkopf wie möglich, ohne Schneiden hinein. </li><li> Drehen Sie die Augenmuschel 180 ° unter Beibehaltung der Rechtwinkligkeit mit Ihrem Körper. Verwenden Technik in Schritt 3.2 eine zweite senkrecht Schnitt zu machen. </li><li> Drehen Sie das Okular und wiederholen Sie die Technik in 3.2 beschrieben, zwei weitere Schnitte zu machen. Alle vier Schnitte sollten möglichst nahe an 90 ° auseinander wie möglich. Beachten Sie, dass das Auge nicht perfekt sphärische so gibt es eine gewisse Variabilität werden. </li></ol> 4. Cut jede der vier "Laschen" in zwei Hälften, die sich in einem Acht-Blütenblatt Blüte-Struktur <ol><li> Übertragen Sie die geviertelt Augenmuschel aus dem 35-mm-Schale auf einen sauberen Objektträger. Mit der Augenmuschel nach oben, darunter Kugel mit dem 45 ° Zange. Heben Sie ihn aus der Flüssigkeit und legen Sie es auf einen sauberen Objektträger. </li><li> Mit beiden Paare von abgewinkelten Pinzette vorsichtig öffnen sich die Augen, mit der neuronalen Netzhaut nach oben zeigt. AUF KEINEN FALL DIE neuralen Retina-es hilft dem Auge zu halten einige seiner Kugelform, so dass Sie nicht berufstätig sind dagegen. Es schützt auch die RPE entfernt, versehentlich in den folgenden Verfahren beschädigt. </li><li> Drehen Sie das Bild, bis eines der Blütenblätter steht senkrecht auf den Körper. </li><li> Verwenden Sie Ihre 15 ° Pinzette vorsichtig greifen die Ecke des Blütenblatt. Die Ecke des Blütenblatt sollte Hornhaut, nicht neuronalen Netzhaut oder RPE. Heben Sie die Ecke vorsichtig, so dass sie ihre Krümmung zu behalten. </li><li> Setzen Sie den unteren Klinge Ihrer Feder Schere zwischen dem Blütenblatt und der Folie. Richten Sie Ihr Schere, so dass eine einzelne, gerade, rechtwinklig geschnitten aus der Hornhaut-Sklera-Kluft in Richtung des Sehnervenkopfes gemacht werden kann. Cut möglichst nahe an den Sehnervenkopf wie möglich without Schneiden hinein. Lassen Sie das Blütenblatt, so dass sie auf der Folie liegen. </li><li> Drehen Sie die Folie 90 °, so dass die nächste Blütenblatt senkrecht auf Ihren Körper. Wiederholen Sie Schritt 4.5. </li><li> Wiederholen Sie die Schritte 4.5 und 4.6 noch zweimal. Die resultierende Struktur sollte wie ein Acht-Blütenblatt Blüte aussehen. </li></ol> 5. Entfernen Sie die neuralen Netzhaut <ol><li> Pipette 100-200 ul 1X PBS auf die Probe. Dies wird die neuronale Netzhaut klebt, wie Sie diese abziehen des RPE zu verhindern. </li><li> Typischerweise werden die neuronalen Netzhaut ist lose mit dem RPE befestigt. Allerdings dauert es, Übung und Geschick, um nur die neuralen Netzhaut und nicht der RPE zu entfernen. Fassen Sie ein Blütenblatt der neuronalen Netzhaut mit einem Paar abgewinkelte Pinzette und stabilisiert (gedrückt halten) den Rest des Auges mit dem anderen Paar abgewinkelte Pinzette. Ziehen Sie die neuralen Netzhaut weg vom Rest des Auges. Wiederholen Sie diesen Vorgang, bis das gesamte neuronale Netzhaut entfernt worden ist. * Tipp: Kleben Sie die Spitze des 15 ° Zange in den Sehnervenkopf für das Auge zu verankern. Dann nutzen Sie die 45 ° Pinzette aufkehren unter der neuronalen Netzhaut und heben Sie sie ab und weg. Es ist normalerweise am besten, die neuronalen Netzhaut von der Sehnerv Kopf in Richtung der Corneo-Sklera-teilen zu heben. Achten Sie darauf, wegzuziehen alle losen Reste der Iris. Die Iris ist ganz klebrig und kann ansonsten auf die RPE stecken. </li><li> Spülen Sie die Probe mit 1X PBS. Pipette 100-200 ul 1X PBS in die Probe und saugen ihn wieder aufzubauen. Entsorgen Sie die PBS. Bei Bedarf wiederholen, um Staub und Schmutz zu entfernen. </li></ol> 6. Montieren Sie Probe (n) auf einer Folie <ol><li> Pipette 80-90 ul von 90% Glycerin auf eine neue Folie in eine rechteckige Form. Verwenden Sie die Seite der Pipettenspitze, um eine gleichmäßige, rechteckige Abstrich von Glycerin zu machen. (Dies ist das Verfahren für die Montage von zwei RPE auf einer Folie.) </li><li> Setzen Sie den unteren Arm von 15 ° Zange unter der Probe. Heben Sie die Probe aus dem Sezieren gleiten. </li><li> Langsam senken die Probe in das Glycerin. Sanft wiggle der Zange, wie Sie sie herausziehen unter der Probe. </li><li> Wiederholen Sie die Schritte 6,1-6,3 für die anderen Proben. </li><li> Drehen Sie die Folie, so dass die lange Seite senkrecht auf Ihren Körper. Halten Sie Ihr Deckglas in einem 45 ° Winkel auf die Folie, so dass es zu berühren ist die Folie. Move it auf die Glycerin-Abstrich, bis sie sich berühren. Aufrechterhaltung des Kontakts zwischen dem Deckglas und Objektträger, langsam das Deckglas entfernt von der Abstrich, auf den Rand der Folie. Line up den langen Seiten des Schlittens und das Deckglas, so dass sie parallel sind. Halten Sie die Ecken des Deckglases zwischen Daumen und Zeigefinger. </li><li> Nehmen Sie den 15 ° Zange in der anderen Hand. Cradle der oberen (kostenlos) Rand des Deckglases in die Armbeuge. Sehr langsam, senken Sie die Abdeckung aus Glas. Wenn der Kontakt zwischen dem Deckglas und Glycerin gemacht wird, zu stoppen und warten auf die Glycerin zu migrieren. Wiederholen Sie diesen Senken und warten, bis die RPE ganzen mounts vollständig abgedeckt werden. Dies ist die hochviskose Glycerin aus der Aufnahme von Luftblasen zu verhindern. NICHT drücken Sie auf dem Deckglas - das Glycerin wird Squeeze-out unter ihm, was Haftung sehr schlecht. </li><li> Mit klaren Nagellack, Farbe rund um den Perimeter, wo das Deckglas und Objektträger zu erfüllen. </li><li> Legen Sie die Folie auf der Oberseite eines leeren Rack, um zu trocknen. </li></ol> 7. Repräsentative Ergebnisse: Das Ergebnis dieser Prozedur sollte eine Struktur, die wie eine Blume aussieht und sollte recht symmetrisch sein. <img src="/files/ftp_upload/2563/2563fig1.jpg" alt="Abbildung 1" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Abbildung 1"> Abbildung 1. Whole mount RPE von einem Wildtyp C67Bl/6J Maus. RPE aus schwarzem oder agouti Tiere sollten von dunkelbrauner Farbe und sollte eine glatte Oberfläche haben. Es ist normal, Wellen in der Topographie der Blütenblätter kündigen. Die Pigmentierung auf jedem geben Proben können etwas variable, durch variable Dichte der Pigmentierung sowohl der RPE und der darunter liegenden Aderhaut. Weiße Pfeile zeigen auf hypopigmentierte "Kanäle" - das ist normal und ist aufgrund der zugrunde liegenden Gefäßsystem des Auges. Blauer Pfeil zeigt auf physische Schäden am RPE und der zugrunde liegenden Aderhaut. <img src="/files/ftp_upload/2563/2563fig2.jpg" alt="Abbildung 2" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Abbildung 2"> Abbildung 2. Whole mount RPE aus einer verdünnten Maus. Proben aus verdünnter Tieren geerntet werden in der Farbe von fast transparent zu Café au lait und in jeder ein Exemplar ist wie die Variabilität in sich haben, angegeben in schwarzen Kreisen hier. Im Allgemeinen sind RPE von jüngeren Tieren geerntet leichter und die von älteren Tieren geerntet werden dunkler. Schwarze Pfeile zeigen einige der zugrunde liegenden Blutgefäßen, die hypopigmentierte erscheint. <img src="/files/ftp_upload/2563/2563fig3.jpg" alt="Abbildung 3" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Abbildung 3"> Abbildung 3. Phalloidin-Färbung kann verwendet werden, um körperliche Schäden an der RPE erkannt werden. Phalloidin-Färbung deutlich die Zellmembranen, zeigt die sechseckige Form des Epithels. (A) Beispiel aus einem schwarzen Maus. (B) Beispiel aus einer verdünnten Maus. <img src="/files/ftp_upload/2563/2563fig4.jpg" alt="Abbildung 4" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Abbildung 4"> Abbildung 4. Ein schlecht präpariert RPE aus einer verdünnten Maus. (A) Werte in Klammern zeigen die Margen der Hornhaut, die zu breit sind, die dazu führen Knicken und / oder Falten können. Innerhalb der schwarzen Kreis sieht man große Mengen von Fremdstoffen Gewebe, das nicht aus dem hinteren Teil des Auges entfernt worden sind. Sie sind besonders offensichtlich, da die Probe aus einer verdünnten Tier. Das Blütenblatt in der linken unteren teilweise umgeschlagen. (B) Das ganze Berg sieht aus wie ein Windrad. Schwarze Pfeile zeigen einige der Einschnitte, die gemacht wurden. Viele der Kürzungen aus der Hornhaut-Sklera-Kluft in Richtung des Sehnervs sind nicht im Einklang mit dem Durchmesser. (C) Schwarze Pfeile zeigen an, wie die Kürzungen hätte erfolgen müssen, in Einklang mit dem Durchmesser und senkrecht zur Tangente.

<ol><li>Bishop, A. J., Kosaras, B., Sidman, R. L., Scheistl, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Benzo%28a%29pyrene+andX-rays+induce+reversions+of+the+pink-eyed+unstable+mutation+in+the+retinal+pigmentepithelium+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mutat.+Res.%22%5BJournal%5D)">Benzo(a)pyrene andX-rays induce reversions of the pink-eyed unstable mutation in the retinal pigmentepithelium of mice.</a> Mutat. Res.. 457, 31-31 (2000).</li>
<li>Reliene, R. H. lavacove, Mahadevan, A., Baird, B., M, W., Schiestl, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diesel+exhaust+particles+cause+increased+levels+of+DNA+deletions+after+transplacental+exposure+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mutat.+Res%22%5BJournal%5D)">Diesel exhaust particles cause increased levels of DNA deletions after transplacental exposure in mice.</a> Mutat. Res. 570, 245-2452 (2005).</li>
<li>Bishop, A. J., Barlow, C., Wynshaw-Boris, A. J., Scheistl, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atm+deficiency+causes+increased+frequency+of+intrachromosomal+homologous+recombination+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Atm deficiency causes increased frequency of intrachromosomal homologous recombination in mice.</a> Cancer Res. 60, 395-399 (2000).</li>
<li>Brown, A. D., Claybon, A. B., Bishop, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+WRN+helicase+domain+is+not+required+for+spontaneous+homologous+recombination-mediated+DNA+deletion%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Nucleic+Acids%22%5BJournal%5D)">Mouse WRN helicase domain is not required for spontaneous homologous recombination-mediated DNA deletion.</a> J. Nucleic Acids. , (2010).</li>
<li>Claybon, A., Karia, B., Bruce, C., Bishop, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PARP1+suppresses+homologous+recombination+events+in+mice+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">PARP1 suppresses homologous recombination events in mice in vivo.</a> Nucleic Acids Res. , Forthcoming (2010).</li>
<li>Bishop, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((p53-%2C+and+Gadd45a-deficient+mice+show+an+increased+frequency+ofhomologous+recombination+at+different+stages+during+development%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">p53-, and Gadd45a-deficient mice show an increased frequency ofhomologous recombination at different stages during development.</a> Cancer Res. 63, 5335-5343 (2003).</li>
<li>Bodenstein, L., Sidman, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+and+development+of+the+mouse+retinalpigment+epithelium.+Part+I.+Cell+and+tissue+morphometrics+and+topography+of+mitoticactivity%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Growth and development of the mouse retinalpigment epithelium. Part I. Cell and tissue morphometrics and topography of mitoticactivity.</a> Dev Biol. 121, 192-204 (1987).</li>
<li>Burke, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+phenotype+and+the+RPE%3A+is+the+answer+blowing+in+the+Wnt%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Epithelial phenotype and the RPE: is the answer blowing in the Wnt?</a> Prog Retin. Eye Res. 27, 579-595 (2008).</li>
</ol>

Das RPE ist die Website des p un-Assay, einem In-vivo-Assay von Homologie-directed reparieren. Die p un-Assay wurde verwendet, um die Auswirkungen der verschiedenen DNA-Schäden 1,2 und DNA-Schäden Signal-und Reparatur-Gene 3,4,5 über die Häufigkeit von Homologie-directed Reparatur zu studieren. Dieser Test ist sehr empfindlich, Aufdeckung Single-Cell-Veranstaltungen auf der RPE 1. Es kann auch erkennen, Unterschiede im Timing der Homologie...

<table><tbody><tr><td>gerade Pinzette</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-4903</td><td>Spitze: .08 x .04 mm Material: INOX</td></tr><tr><td>45&amp;#x00B0;-Pinzette</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5005</td><td>Spitze: .05 x .01 mm Material: INOX</td></tr><tr><td>15&amp;#x00B0;-&quot;up&quot;-Pinzette</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5045A</td><td>Spitze: .1 x .06 mm Material: INOX</td></tr><tr><td>Federschere</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5604</td><td>kombinierte Spitzenbreite 0,3 mm, Schneidkantenlänge 3 mm, Material: Edelstahl</td></tr><tr><td>binokulares Stereomikroskop</td><td>Carl Zeiss, Inc.</td><td>Discovery V.8</td><td>reflektierte Lichtquelle verwenden</td></tr><tr><td>Phalloidin</td><td>Invitrogen</td><td>A22283</td><td>Alexa Fluor 546</td></tr></tbody></table>

präparation einer maus eye für einen ganzen berg von retinalen pigmentepithel

Dissection of a Mouse Eye for a Whole Mount of the Retinal Pigment Epithelium

Das retinale Pigmentepithel (RPE) liegt an der Rückseite des Säugetier-Auge, gerade unter der neuralen Netzhaut, die Photorezeptoren (Stäbchen und Zapfen) enthält. Das RPE ist eine Monoschicht von pigmentierten kubischen Zellen und Mitarbeiter eng mit der neuronalen Retina knapp darüber. Dieser Verein macht die RPE von großem Interesse für Forscher untersuchen Netzhauterkrankungen. Das RPE ist auch der Ort einer in vivo-Assay von Homologie-directed DNA-Reparatur, die p un-Assay. Die Maus Auge ist besonders schwer zu sezieren aufgrund seiner geringen Größe (ca. 3,5 mm im Durchmesser) und seine Kugelform. Dieser Artikel zeigt im Detail ein Verfahren für die Präparation des Auges führt einen ganzen Berg der RPE. In diesem Verfahren zeigen wir, wie man mit und nicht gegen die kugelförmige Struktur des Auges zu arbeiten. Kurz gesagt, sind das Bindegewebe, Muskeln und Sehnerv aus dem hinteren Teil des Auges entfernt. Dann werden die Hornhaut und die Linse entfernt. Als nächstes sind strategische Schnitte, die zu erheblichen Abflachung der übrigen Gewebe. Schließlich ist der neuronalen Retina vorsichtig abgehoben, enthüllt eine intakte RPE, die noch auf die zugrunde liegende Ader-und Lederhaut befestigt wird. Das ganze Berg kann die p un-Assay oder für die Immunhistochemie oder Immunfluoreszenz Beurteilung des RPE Gewebe durchzuführen.

Eine formale Demonstration der Zerlegung einer Maus Auge, was zu einem ganzen Berg der retinalen Pigmentepithels.

Präparation einer Maus Eye für einen ganzen Berg von retinalen Pigmentepithel

Das retinale Pigmentepithel (RPE) befindet sich im hinteren Teil des Auges von Säugetieren, direkt unter der neuralen Retina, welche die Photorezeptoren (Stäbchen und ...

Mein Name ist Allison Clavon. Ich bin wissenschaftliche Mitarbeiterin von Dr. Alex Bishop am Gree Children's Cancer Research Institute des UT Health Science Center in San Antonio, Texas. Heute werde ich Ihnen zeigen, wie man ein Nagetierauge präpariert, um die gesamte retinale Pigmentepithelzellschicht zu gewinnen.Dieses Gewebe ist von Interesse für die Untersuchung der Netzhautentwicklung und von Erkrankungen und stellt zudem den Ort eines In-vivo-Assays zur homologieabhängigen DNA-Reparatur dar. Beginnen wir also. Hier ist ein Auge, das zur Dissektion bereit ist.Zunächst betrachten wir die anatomischen Strukturen, die Sie während des gesamten Verfahrens als Orientierungspunkte verwenden werden. Dies sind die Augen eines verdünnten Tieres. Hier befindet sich der Sehnerv an der Rückseite des Auges gegenüber.Das ist die Hornhaut. Die Iris ist durch die Hornhaut sichtbar. Der weißliche Bereich auf der Rückseite des Auges ist die Sklera.Daher wird dieser Bereich als Grenze zwischen Hornhaut und Lederhaut bezeichnet. Der erste Schritt der Dissektion besteht darin, überflüssige Gewebe wie Muskelbindegewebe und den Sehnerv zu entfernen. Anschließend muss die Hornhaut entfernt werden, wob

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Research

Forschung

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowissenschaften

Die Dissektionstechnik zeigt Ausnehmen des Glaskörpers, der Netzhaut und Linse aus dem Auge der Maus, die Trennung durch Zentrifugation und Charakterisierung mit Protein-Assays.

Ausweiden der Maus Glaskörper und Netzhaut für Proteomik-Analysen

Die Dissektionstechnik zeigt Enukleation der Maus Auge für Gewebefixierung um Phänotypisierung in Hochdurchsatz-Screening durchzuführen.

Maus Eye Enukleation für Remote High-throughput Phänotypisierung

Dieses Video beschreibt ein Protokoll, um den Netzhautbecher ohne die äußeren Deckschichten aus dem Augapfel einer Maus zu isolieren. Das extrahierte Netzhautgewebe kann helfen, verschiedene Stoffwechselwege zu untersuchen, die in den Netzhautzellen ablaufen.

Extraktion eines Netzhautbechers aus der Maus: Ein chirurgischer Eingriff zur Gewinnung eines intakten Netzhautbechers aus einem Mausauge

Das hier beschriebene Protokoll dient zur strukturellen Bewertung eines Wholemount-Netzhautpräparats. Dazu gehören Beschreibungen der Gewebedissektion, der Montage auf einem hydrophilisierten Membraneinsatz aus Polytetrafluorethylen (PTFE), der Bolusbeladung mit fluoreszierenden Markern und ein Vergleich der Fixierung mit Carbodiimid und Paraformaldehyd für die immunhistochemische Analyse zellulärer und synaptischer Komponenten.

Optimiertes Protokoll für die retinale Wholemount-Vorbereitung für Bildgebung und Immunhistochemie

Dieser Bericht beschreibt umfassende Methoden zur Vorbereitung von gefrorenen Mausnetzteilen für die Immunhistochemie (IHC).  Die beschriebenen Methoden umfassen die Zerlegung des okularen posterioren Bechers, die Paraformaldehydfixierung, die Einbettung in die Medien der optimalen Schnitttemperatur (OCT) und die Gewebeorientierung, die Schnitt- und Immunfärbung.

Vorbereitung von Maus-Retinal-Cryo-Sektionen für die Immunhistochemie

Dieses Protokoll, das ursprünglich von Fernandez-Godino et al. im Jahr 20161berichtet wurde, beschreibt eine Methode zur effizienten Isolierung und Kultur von Maus-RPE-Zellen, die innerhalb einer Woche auf Transwell-Platten eine funktionelle und polarisierte RPE-Monoschicht bilden. Das Verfahren dauert ca. 3 Stunden.

Effiziente Dissektion und Kultur der primären Maus retinalen Pigmentepithelzellen

In diesem Artikel wird ein Protokoll für die okuläre Mikrodissektion bei Nagetieren vorgestellt. Der Prozess beinhaltet die Enukleation des Augapfels zusammen mit der Nickhaut (d.h. dem dritten Augenlid). Es folgt die Trennung der hinteren und vorderen Augenmuscheln.

Mikrodissektion des Nagetierauges

Mausmodelle können nützliche Werkzeuge sein, um die Biologie des retinalen pigmentierten Epithels (RPE) zu untersuchen. Es wurde festgestellt, dass Mäuse eine Reihe von RPE-Pathologien entwickeln können. In dieser Arbeit beschreiben wir ein Phänotypisierungsprotokoll zur Aufklärung und Quantifizierung von RPE-Pathologien in Mäusen mittels Licht-, Transmissionselektronen- und konfokaler Mikroskopie.

Ein Protokoll zur Bewertung und Quantifizierung von retinalen pigmentierten Epithelpathologien in Mausmodellen der altersbedingten Makuladegeneration

Das retinale Pigmentepithel (RPE) fungiert als entscheidende Barriere zwischen Aderhaut und Netzhaut und fördert die Gesundheit und Funktion von retinalen Zelltypen, wie z. B. Photorezeptoren. Darin beschreiben wir ein einfaches und effektives Protokoll zur Isolierung und Kultivierung adulter muriner RPE.

Eine vereinfachte Methode zur Isolierung und Kultivierung von retinalen Pigmentepithelzellen aus erwachsenen Mäusen

Dieses Protokoll beschreibt das Verfahren zur Isolierung der Netzhaut der gesamten Maus und zur Durchführung einer Immunfärbung zur Markierung aller retinalen Ganglienzellen (RGCs). Dem Prozess folgt die Bildgebung und automatische Zählung von RGCs mit KI-basierter Software, die eine einfache, schnelle und genaue Methode zur Quantifizierung von RGCs in der gesamten Netzhaut der Maus bietet.

Immunfärbung und automatische Zählung von retinalen Ganglienzellen der Maus

Es wird ein Protokoll zur Vorbereitung von Kryoschnitten der Maus-Netzhaut und zur Durchführung von Immunfärbungen an Photorezeptoren beschrieben. Dieser Artikel ermöglicht es Forschern, konsistente Schnellschnitte der Netzhaut von Mäusen mit gut erhaltener Morphologie und qualitativ hochwertigen Immunfärbeergebnissen zu erstellen.

Kryosektion und Immunfärbung der Netzhaut der Maus

Lernen Sie die Präparation eines Mausauges für ein Whole Mount des retinalen Pigmentepithels. Diese Technik ermöglicht die Untersuchung der Netzhautentwicklung und retinaler Erkrankungen.

Präparation einer Maus Eye für einen ganzen Berg von retinalen Pigmentepithel

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