Peritoneale Isolierung von Neutrophilen niedriger Dichte: Eine Technik zur Gewinnung von Neutrophilen niedriger Dichte aus Peritonealspülflüssigkeit unter Verwendung von magnetisch aktivierter Zellsortierung

Neutrophile mit niedriger Dichte (LDNs) sind eine eigenständige neutrophile Subpopulation, die bei pathologischen Zuständen wie Magen-Darm-Krebs in erhöhter Zahl vorkommt. LDNs können aus den Waschungen der Bauchhöhle oder der Spülflüssigkeit von Patienten isoliert werden.

Filtern Sie zunächst die Spülflüssigkeit, um Gewebereste zu entfernen. Das Filtrat wird zentrifugiert, um ein Pellet zu erhalten, das Blutzellen, einschließlich LDNs, enthält. Es wird in einem geeigneten Puffer resuspendiert. Schichten Sie diese Suspension über ein geeignetes Dichtegradientenmedium, das optimal für die LDN-Isolierung ist.

Zentrifuge, um die verschiedenen Blutbestandteile anhand ihrer relativen Dichte zu trennen. Die dichteren Erythrozyten bilden die unterste Schicht, während die am wenigsten dichte Plasmafraktion die oberste Schicht bildet. Die weniger dichten LDNs besetzen die Zwischenschicht zusammen mit anderen mononukleären Zellen.

Übertragen Sie die Zwischenschicht in ein frisches Röhrchen, das ein Blockierungsreagenz enthält. Die Reagenzkomponenten blockieren unspezifische Bindungsstellen auf den Oberflächen aller Nicht-Zielzellen und erhöhen die Spezifität für LDN bei der anschließenden Ma