Zeitraffer-Fluoreszenzmikroskopie von neutrophilen extrazellulären Fallen oder NETs: Eine Technik zur Analyse der Postadhäsionsinteraktion zwischen Krebszellen und NETs

Bei pathologischen Zuständen wie Krebs setzen aktivierte Neutrophile extrazelluläre Fallen oder NETs frei - ein Netzwerk extrazellulärer DNA-Fasern, die mit Histonen und proteolytischen Enzymen assoziiert sind. Diese Strukturen schließen Krebszellen ein und spielen eine Schlüsselrolle bei der Metastasierung von Krebs.

Um das Postadhäsionsverhalten von eingeschlossenen Krebszellen in NETs in vitro zu untersuchen, kultivierte man zunächst Neutrophile mit niedriger Dichte - eine neutrophile Subpopulation - in einer polymerbeschichteten Kulturschale, die die Zellanheftung erleichtert. Inkubieren, um die Neutrophilen zu aktivieren und netzartige NETs freizusetzen.

Fügen Sie als Nächstes einen membranundurchlässigen, grün fluoreszierenden Kernfarbstoff hinzu, um die DNA-Fasern in NETs spezifisch zu färben. Entfernen Sie das verbrauchte Medium. Geben Sie eine Suspension von Krebszellen in die Neutrophilenkultur.

Inkubieren Sie die Kultur für einen kurzen Zeitraum, um die Interaktion zwischen Krebszellen und -NET zu erleichtern. Die DNA-Komponente von NETs fungiert als chemotaktischer Faktor, der die Migration von Krebszellen stimuliert und deren Adhäsion an NETs unterstützt.

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